[发明专利]化学成分确定的无血清细胞培养基

权利要求书

1.一种化学成分确定的无血清细胞培养基，其包含：

a)基础培养基，其中所述基础培养基不含血清；和

b)基础培养基补充剂，其包含：

i)一种或多种细胞生长因子；

ii)一种或多种磷脂生长因子；和

iii)一种或多种WNT信号传导途径激活剂。

2.如权利要求1所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述基础培养基包含一定量的DMEM和一定量的MCDB，其中DMEM与MCDB之比为约0.75:1.25v/v至约1.25:0.75v/v。

3.如权利要求2所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述DMEM与MCDB之比选自由下述范围组成的组：约0.75:1.25至约0.85:1.15，约0.80:1.20至约0.90:1.10，约0.85:1.15至约0.95:1.05，约90:110至约1.05:0.95，约1.00:1.00至约1.10:0.90，约1.05:0.95至约1.15:0.85，约1.10:0.90至约1.20:0.80，和约1.15:0.85至约125:0.75。

4.如权利要求2所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种细胞生长因子选自由胰岛素、bFGF、PDGF-bb、EGF、TGF-β1和IGF-1组成的组。

5.如权利要求4所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述胰岛素在所述化学成分确定的无血清细胞培养基中的浓度为约4mg/L至约6mg/L。

6.如权利要求5所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述bFGF、PDGF-bb、EGF、TGF-β1和IGF-1中的每一种在所述化学成分确定的无血清细胞培养基中的浓度为约1ng/mL至约20ng/mL。

7.如权利要求6所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述bFGF、PDGF-bb、EGF、TGF-β1和IGF-1中的每一种在所述化学成分确定的无血清细胞培养基中的浓度选自由下述范围组成的组：约1ng/mL至约4ng/mL，约3ng/mL至约5ng/mL，约4ng/mL至约6ng/mL，约5ng/mL至约7ng/mL，约6ng/mL至约8ng/mL，约7ng/mL至约9ng/mL，约8ng/mL至约10ng/mL，约9ng/mL至约11ng/mL，约10ng/mL至约12ng/mL，约11ng/mL至约13ng/mL，约12ng/mL至约14ng/mL，约13ng/mL至约15ng/mL，约14ng/mL至约16ng/mL，约15ng/mL至约17ng/mL，约16ng/mL至约18ng/mL，约18ng/mL至约20ng/mL，和约19ng/mL至约20ng/mL。

8.如权利要求2所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种脂质生长因子选自由LPA和S1P组成的组。

9.如权利要求8所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种脂质生长因子在所述基础培养基中的浓度为约100nM至约200nM。

10.如权利要求9所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种脂质生长因子在所述基础培养基中的浓度选自由下述范围组成的组：约100nM至约120nM，约110nM至约130nM，约120nM至约140nM，约130nM至约150nM，约140nM至约160nM，约150nM至约170nM，约160nM至约180nM，约190nM至约200nM。

11.如权利要求2所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种WNT信号传导途径激活剂选自由人WNT3A和RSPO1组成的组。

12.如权利要求11所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种WNT信号传导途径激活剂在所述基础培养基中的浓度为约20ng/mL至约200ng/mL。

13.如权利要求12所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其中，所述一种或多种WNT信号传导途径激活剂包含浓度为约20ng/mL的人WNT3A和浓度为约40ng/mL的RSPO1的组合。

14.如权利要求2所述的化学成分确定的无血清细胞培养基，其还包含一种或多种类固醇。