[发明专利]一种从节图霉属菌种获得漆酶的方法

权利要求书

1.一种从节图霉属菌种MTCC5479菌株中分离漆酶的方法，其包括：

a.如本文所描述使节图霉属菌种MTCC5479菌株在无菌液体培养基中生长；

b.用步骤a中获得的菌株接种含有生产培养基的烧瓶；

c.使步骤b中获得的培养基30℃下在旋转振荡器上以约180rpm的速度温育接近72小时；

d.在72小时后，用二甲苯胺0.00001-0.0001%（v/v），CuSO₄.5H₂O，0.0025-0.025%（w/v）或100μΜ-1000μΜ诱导步骤c中获得的培养物；

e.使步骤d中获得的培养物在接近30℃温育约12-15天；

f.取出步骤e中获得的培养物，并且通过以接近8000Xg离心接近10分钟，使分泌到培养基内的漆酶与细胞团分离；

g.通过本文描述的方法浓缩且纯化步骤f中获得的酶。

2.如权利要求1中所述的方法，其中，所述漆酶的得率范围为9-14IU/ml。

3.通过如权利要求1-2中要求的方法产生的漆酶，其特征在于，具有：

I.通过SDS-PAGE测得接近63kDa，或通过MALDI-ToF方法测得58.33kDa的分子量；

II.约3.5的pI；

III.在30℃，针对在50mMMcIlvain缓冲液，pH4.0中的1mMABTS的比活性是接近347IUmg^-1或5784nkatalmg^-1，以及，在30℃，使用在50mMMcIlvain缓冲液，pH5.5中的0.02mM丁香醛连氮，比活性为6380IUmg^-1或10635nkatalmg^-1；

IV.具有Seq Id.No.l的N末端氨基酸序列。

4.如权利要求3中所述的漆酶，其中，所述酶在pH2.5-8.5、优选在pH3-5.5起作用。

5.如权利要求3中所述的漆酶，其中，所述酶在温度30-70℃、优选在温度35-50℃在染料降解处理中是有效的。

6.如权利要求3中所述的漆酶，其中，在与惰性物质或盐掺和或者混合以增加其贮存期限之后，所述的酶制剂为液体、粉末或颗粒的形式。

7.如权利要求3中所述的漆酶，其对于降解以单独或混合物形式的纺织品染料有用，所述纺织品染料包括偶氮、三苯基甲烷、靛青、红色（erythroid）的一组染料。

8.如权利要求3中要求的漆酶，其对于去除污点、对于漂白浆料、对于处理纤维用以增白、对于动物毛发包括羊毛着色、对于处理废水中的一种或多种纺织品染料、对于燃料电池中的阴极制作、对于基于苯酚单体聚合而成的涂料和粘着剂配制是有用的，其中，漆酶具有令人满意的应用。