[发明专利]包含二硫键稳定性Fv片段的双特异性抗体

说明书

本发明涉及三价、双特异性抗体，生产它们的方法，含有所述抗体的药物组合物以及它们的应用。

发明背景

最近过去的几年，开发了多种多样的多特异性重组抗体形式，例如通过融合例如IgG抗体形式和单链结构域的四价双特异性抗体(参见，例如Coloma，M.J.，等人，Nature Biotech 15(1997)159-163；WO2001/077342；和Morrison，S.L.，Nature Biotech 25(2007)1233-1234)。

另外开发了若干能够结合两种或更多种抗原的其他新的形式，其中不再保留抗体核心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)，例如二抗体、三抗体或四抗体、微抗体(minibody)、若干单链形式(scFv、Bis-scFv)(Holliger，P.，等人，Nature Biotech 23(2005)1126-1136；Fischer，N.，和Léger，O.，Pathobiology 74(2007)3-14；Shen，J.，等人，Journal of Immunological Methods 318(2007)65-74；Wu，C.，等人，Nature Biotech.25(2007)1290-1297)。

所有这些形式都使用接头来将抗体核心(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)与另外的结合蛋白(例如scFv)融合或者融合例如两个Fab片段或scFvs(Fischer，N.，和Léger，O.，Pathobiology 74(2007)3-14)。需要注意的是可能希望通过维持与天然发生的抗体的高度相似性来保留通过Fc受体结合而被介导的效应子功能，例如补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

在US6,897,044中报道了制备生物活性抗体二聚体的方法。在US7,129,330中报道了具有至少四个通过肽接头而彼此连接的可变结构域的多价Fv抗体构建体。在US2005/0079170中报道了二聚和多聚抗原结合结构。在US6,511,663中报道了三价或四价单特异性抗原结合蛋白，其包括通过连接结构彼此共价结合的三个或四个Fab片段，该蛋白并不是天然免疫球蛋白。在WO2006/020258中，报道了能够有效地在原核和真核细胞中表达并且可用于治疗和诊断方法的四价双特异性抗体。在US2005/0163782中报道了在包含两种类型的多肽二聚体的混合物中将通过至少一个链间二硫键连接的二聚体与不通过至少一个链间二硫键连接的二聚体分离或优选合成通过至少一个链间二硫键连接的二聚体的方法。在US5,959,083中报道了双特异性四价受体。在WO2001/077342中报道了具有三个或更多个功能抗原结合位点的改造的抗体。在WO2007/109254中报道了由稳定的scFv组成或包含稳定的scFv的稳定的结合分子。

在WO2007/024715中，报道了双可变结构域免疫球蛋白作为改造的多价和多特异性结合蛋白。

WO2011/034605涉及使用卷曲螺旋和/或tether构建的改造的蛋白复合物以及制造、使用和纯化此种复合物，如含有多特异性抗体或其他多特异性Fc的复合物的方法。

发明概述

本发明涉及双特异性抗体，其包含

a)特异性地结合第一抗原并且由两条抗体重链和两条抗体轻链组成的全长抗体；

b)特异性地结合第二抗原的Fv片段，所述Fv片段包含VH²结构域和VL²结构域，其中两个结构域通过二硫桥相连，并且

其中只有VH²结构域或VL²结构域之一通过肽接头与特异性地结合第一抗原的全长抗体的重链或轻链融合。

在一个实施方式中，根据权利要求1的双特异性抗体的特征在于，所述双特异性抗体是三价的并且

或者MH²结构域或者VL²结构域通过肽接头与特异性地结合第一抗原的全长抗体的重链融合。

在一个实施方式中，根据权利要求2的双特异性抗体的特征在于，

VH²结构域或VL²结构域通过肽接头N-端融合至特异性地结合第一抗原的全长抗体的C-端。