[发明专利]由生物质制造纤维二糖

权利要求书

1.一种用于制造纤维二糖的方法，包括以下步骤：

a）使含有纤维素的材料进行酸处理，所述酸处理产生液相和含有纤维素的固相，其中步骤a）过程中的干物质含量在7.5～50%（w/w）之间；

b）将a）中得到的固相与液相分离；

c）使b）中得到的固相在7.5～50%（w/w）的干物质含量下进行纤维素酶处理，其中在包括至少一种表现出纤维二糖水解酶活性的多肽的酶制剂的存在下进行所述纤维素酶处理，从而提供固相和含有纤维二糖的液相，以及

d）将在c）中得到的所述含有纤维二糖的液相与固相分离。

2.根据权利要求1所述的用于制造纤维二糖的方法，其中在步骤c）中，b）中得到的固相的干物质含量在12～20%（w/w）之间。

3.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中进行步骤c）的含有纤维素的材料相对于纤维素的总量含有50%或更多的无定形纤维素。

4.根据权利要求2或3中一项或多项所述的方法，其中步骤a）的所述处理过程中的干物质含量在10～30%之间。

5.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中步骤c）中的酶/底物比为0.01～0.1。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述酶制剂源自缺乏表现出显著β-葡萄糖苷酶活性的酶的有机体。

7.根据权利要求2～5中一项或多项所述的方法，其中所述纤维素酶制剂含有β-葡萄糖苷酶活性，并且其中向待进行步骤c）的含有纤维素的材料添加所述纤维素酶制剂，随后洗涤所述材料，使得固相中的β-葡萄糖苷酶活性最小化或被消除。

8.根据权利要求1～6中一项或多项所述的方法，其中所述纤维素酶制剂包括至少一种来自下列纤维二糖水解酶（EC3.2.1.91）的表现出纤维二糖水解酶活性的多肽：糖基水解酶GH6组的纤维二糖水解酶或糖基水解酶GH7组的纤维二糖水解酶，或者表现出纤维二糖水解酶活性且与SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2中的任一者具有70%或更多的一致性的多肽，并且/或者其中表现出纤维二糖水解酶活性的多肽通过缺乏可测β-葡萄糖苷酶活性的重组酵母或真菌表达宿主的分泌而产生。

9.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中步骤d）的含有纤维二糖的液相中所含的纤维二糖进行进一步的步骤e），其包括：任选地浓缩纤维二糖溶液，并由所述（任选浓缩的）纤维二糖溶液进一步纯化所述纤维二糖。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤e）包括以下的一者或多者：纤维二糖结晶、层析、纳滤、微滤、超滤、经有机溶剂沉淀、或者使用微生物。

11.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中步骤c）和d）重复多次，其中向后续循环中的固相添加新鲜水相。

12.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中通过连续地用新鲜水相替换所述含有纤维二糖的液相来同时进行步骤c）和d）。

13.一种用于由包括纤维二糖和葡萄糖的组合物纯化纤维二糖的方法，包括在葡萄糖氧化酶（GOX）和氧的存在下通过葡萄糖氧化来转化葡萄糖的步骤。

14.根据权利要求1～12中一项或多项所述的方法，其中通过权利要求14所述的方法将所述含有纤维二糖的液相中的葡萄糖转化成葡糖酸。

15.根据权利要求14所述的方法，其中通过一种或数种以下方法来从所述含有纤维二糖的液相中去除通过权利要求14所述的方法得到的葡糖酸：离子交换层析、沉淀、电渗析。

16.根据权利要求1～5中一项或多项所述的方法，其中任何具有β-葡萄糖苷酶活性的多肽的酶活性被抑制剂抑制。

17.一种纤维二糖制剂，其能通过权利要求1～16中的一项或多项得到。

18.根据权利要求17所述的纤维二糖制剂作为食物成分、动物饲料添加剂、化妆品成分的用途。

19.根据权利要求18所述的用途，其中以0.01～1%（w/w）的用量向动物饲料制剂中添加所述纤维二糖制剂。