[发明专利]碱性进料

权利要求书

1.用于培养表达多肽的大肠杆菌(Escherichia coli)细胞的方法，其特征在于所述培养包括在培养过程中加入氨基酸的碱性溶液，所述氨基酸选自天冬氨酸盐、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，

其中所述氨基酸在所述碱性溶液中具有高于在20℃和中性pH的水中的溶解度的浓度，并且所述氨基酸具有30g/l以上的浓度，和

其中所述碱性溶液是10％(w/v)以上的氨溶液，和其中培养的细菌细胞的干细胞重量在培养中的一个时刻是至少20g/l。

2.用于产生多肽的方法，所述方法包括下述步骤：

a)培养包含编码所述多肽的核酸的大肠杆菌细胞，

b)在培养过程中，用包含氨基酸的碱性溶液调节pH值，所述氨基酸选自天冬氨酸盐、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，

c)从细胞或培养基中回收所述多肽并且由此产生所述多肽，

其中所述氨基酸在所述碱性溶液中具有30g/l以上的浓度，和

其中所述碱性溶液是10％(w/v)以上的氨溶液。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述细菌细胞是氨基酸营养缺陷型细胞并且营养缺陷是关于选自天冬氨酸盐、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的氨基酸。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述碱性溶液具有9以上的pH值。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述多肽是人载脂蛋白A1或其衍生物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述载脂蛋白A1具有选自SEQ ID NO：01-35的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述载脂蛋白A1具有选自SEQ ID NO：01，02，34和35的氨基酸序列。

8.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于所述氨基酸具有约50g/l的浓度。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于所述碱性溶液是约12.5％(w/v)的氨在水中的氨溶液。

10.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于所述氨基酸是亮氨酸。

11.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于所述碱性溶液包含亮氨酸和脯氨酸。

12.根据前述权利要求中任一项的方法，其特征在于所述碱性溶液是约12.5％(w/v)的氨溶液并且包含浓度各为约50g/l的氨基酸亮氨酸和脯氨酸。

13.氨基酸的碱性溶液作为细菌细胞的培养中的进料的应用，其中所述氨基酸选自天冬氨酸盐、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，并且所述培养是多达20g/l以上的干细胞重量，并且所述氨基酸在所述碱性溶液中具有30g/l以上的浓度，并且所述碱性溶液是10％(w/v)以上的氨溶液。

14.根据权利要求13的应用，其特征在于所述细菌细胞是氨基酸营养缺陷型细胞，并且营养缺陷是关于选自天冬氨酸盐、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸的氨基酸。

15.根据权利要求2-12中任一项的方法，其特征在于所述大肠杆菌细胞是氨基酸营养缺陷型大肠杆菌细胞。