[发明专利]具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸

权利要求书

1.一种具有β-葡糖苷酶活性的分离的多肽，其选自下组：

(a)多肽，其与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少85%，例如至少86%，至少87%，至少88%，至少89%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，和100%序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在高严格条件或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，(ii)其cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少85%，例如至少86%，至少87%，至少88%，至少89%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，和100%序列同一性；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的包含在一个或多个位置的取代、缺失和/或插入的变体；和

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽具有β-葡糖苷酶活性的片段。

2.权利要求1的多肽，其包含或组成为SEQ ID NO:2或其成熟多肽。

3.权利要求1或2的多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含于质粒pUC19D55EX，所述质粒包含于大肠杆菌NRRL B-50395。

4.一种组合物，其包含权利要求1-3任一项的多肽。

5.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-3任一项的多肽。

6.一种产生权利要求1-3中任一项的多肽的方法，其包括：(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；和

(b)回收所述多肽。

7.一种产生具有β-葡糖苷酶活性的多肽的方法，其包括：

(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养包含权利要求5的多核苷酸的宿主细胞；和

(b)回收所述多肽。

8.一种转基因植物、植物部分或植物细胞，其用编码权利要求1-3中任一项的多肽的多核苷酸转化。

9.一种产生具有β-葡糖苷酶活性的多肽的方法，其包括：

(a)在有助于所述多肽产生的条件下培养权利要求8的转基因植物或植物细胞；和

(b)回收所述多肽。

10.一种产生亲本细胞的突变体的方法，所述方法包括失活编码权利要求1-3中任一项的多肽的多核苷酸，其导致突变体与亲本细胞相比产生较少的所述多肽。

11.一种包含权利要求5的多核苷酸的亚序列的双链抑制RNA(dsRNA)分子，其中任选地所述dsRNA是siRNA或miRNA分子。

12.一种抑制具有β-葡糖苷酶活性的多肽在细胞中表达的方法，其包括对所述细胞施用或者在所述细胞中表达权利要求11的双链RNA(dsRNA)分子。

13.一种分离的多核苷酸，其编码信号肽，所述信号肽包含或组成为SEQ ID NO:2的氨基酸1至21。

14.一种产生蛋白质的方法，其包括：

(a)在有助于所述蛋白质产生的条件下培养重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含编码蛋白质的基因，所述基因可操作地连接于权利要求13的多核苷酸，其中所述基因对于编码信号肽的多核苷酸是外源的；和

(b)回收所述蛋白质。

15.一种降解或转化纤维素材料的方法，其包括：在权利要求1-3中任一项的具有β-葡糖苷酶活性的多肽存在下，用酶组合物处理纤维素材料。

16.权利要求15的方法，进一步包括回收已降解的纤维素材料。

17.一种产生发酵产物的方法，其包括：

(a)在权利要求1-3中任一项的具有β-葡糖苷酶活性的多肽存在下，用酶组合物糖化纤维素材料；

(b)用一种或多种发酵微生物发酵经糖化的纤维素材料以产生发酵产物；和

(c)从所述发酵中回收所述发酵产物。