[发明专利]Sirt5调节剂及其筛选方法

权利要求书

1.一种识别Sirt5脱丙二酰或脱琥珀酰活性的调节剂的方法，包括：

提供候选化合物；

提供底物，所述底物包含与指示剂部分连接的丙二酰或琥珀酰赖氨酸；

在上述候选药物存在的情况下，将底物和Sirt5接触，使底物被Sirt5脱丙二酰和脱琥珀酰化；

用裂解剂接触所述脱丙二酰化或脱琥珀酰化的底物，所述裂解剂裂解所述赖氨酸和所述指示剂部分间的连接，以释放出所述指示剂部分，从而产生可检测的信号；以及

建立信号强度和Sirt5脱丙二酰或脱琥珀酰活性间的相关性；其中，存在所述候选化合物时Sirt5脱丙二酰或脱琥珀酰活性相对于不存在所述候选化合物情况时Sirt5脱丙二酰或脱琥珀酰活性的变化将所述候选化合物识别为Sirt5脱丙二酰或脱琥珀酰活性的调节剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述底物是肽，所述肽包含丙二酰或琥珀酰赖氨酸，所述丙二酰或琥珀酰赖氨酸通过肽键与所述指示剂部分共价连接。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述裂解剂是蛋白水解酶。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述蛋白水解酶是胰蛋白酶。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述指示剂部分有荧光性质。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述指示剂部分包含荧光团，所述荧光团在指示剂部分被裂解和释放时会改变其发射波长。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述指示剂部分包含荧光团，并且所述底物也用淬火基团标记，当所述指示剂部分从底物上裂解时，其会产生荧光信号。

8.如权利要求5所述的方法，其中所述指示剂部分包含荧光团，所述荧光团是供体-受体荧光团对中的一个，并且所述荧光团对中的一个和赖氨酸残基的羧基末端相连，另一个直接或间接地和赖氨酸残基的氨基末端相连。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述指示剂荧光团从底物上裂解时会减弱基于荧光共振能量转移(FRET)的信号强度。

10.如权利要求5所述的方法，其中所述指示剂部分是7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述底物是ISGASE(SuK)-AMC (SEQ ID NO:11)。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述候选化合物是小分子。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述候选化合物具有下式：

其中，

R₁是阴离子或可电离基团；

R₂选自S、NR₅、和O，其中R₅是H、甲基、乙基、异丙基、苯基、或苄基；

当R₁是羧基时，则R₂不是O，并且当R₂是O时，则R₁不是羧基；

X₀、X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆和X₇独立地选自-(CH₂)n-（其中n表示1、2、或3），-NR₅-、-O-、-S-或键，条件是X₀-X₄中至少一个不是键，并且X₅-X₇中至少一个不是键；

R₃和R₄独立地选自H、碳氢化合物(R)、氨基酸、二肽、三肽、寡肽、蛋白质、核碱基、核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、寡核苷酸、单糖、二糖、寡糖、和保护基团，或其组合或其修饰形式。

14.如权利要求1所述的方法，进一步包括检测候选分子影响Sirt1、2、或3中任何一个的脱乙酰活性的能力。