[发明专利]使用光的核酸的扩增抑制方法和高灵敏度的选择性核酸扩增方法

权利要求书

1. 使具有靶位点的核酸、与包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类的发夹探针共存，通过光照射使该具有靶位点的核酸与该发夹探针进行光连接，抑制由核酸扩增法引起的包含靶位点的检测区的扩增的方法。

2. 突变型核酸的检测方法，该方法是通过选择性地扩增包含突变型核酸的靶位点的检测区，来检测是否存在该突变型核酸，该方法包括下述步骤：

步骤(a)：使包含光连接性核酸类的发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的野生型核酸分子特异性地形成杂交体，所述光连接性核酸类具有与具有野生型核酸序列的靶位点互补的序列；

步骤(b)：对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接；

步骤(c)：将上述步骤(a)、(b)的反应产物供给核酸扩增反应；

步骤(d)：分析上述扩增产物。

3. 突变型核酸检测方法，该方法是通过选择性地扩增包含突变型核酸的靶位点的检测区，来检测是否存在该突变型核酸，该方法包括下述步骤：

步骤(a)：使包含光连接性核酸类的发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的野生型核酸分子特异性地形成杂交体，所述光连接性核酸类具有与具有野生型核酸序列的靶位点互补的序列；

步骤(b)：对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接；

步骤(c)：在核酸扩增反应中进行上述步骤(a)、(b)；

步骤(d)：分析上述扩增产物。

4. 权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，上述核酸扩增法为PCR法。

5. 权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，上述核酸扩增法为实时PCR法。

6. 权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，上述发夹探针具有与靶核酸分子的有义链和/或反义链互补的序列。

7. 权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，上述发夹探针的链长为7～30。

8. 权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，上述光照射通过350～380nm范围的波长来进行。

9. 权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，上述光照射在通常的互补链彼此之间结合和解离的温度循环中在互补链彼此之间可以结合的温度下进行1次以上。

10. 权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，上述光照射通过赋予了350～380nm范围的波长的光照射功能的核酸扩增装置来进行。

11. 试剂盒，其中包含发夹探针和引物，所述发夹探针包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类，所述引物扩增包含靶位点的检测区，该试剂盒抑制由基因扩增法引起的包含靶位点的检测区的扩增。

12. 突变型核酸检测试剂盒，其中包含发夹探针和引物，所述发夹探针包含具有与具有野生型核酸序列的靶位点互补的序列的光连接性核酸类，所述引物扩增包含靶位点的检测区，该试剂盒通过选择性地扩增包含突变型核酸的靶位点的检测区，来检测是否存在该突变型核酸。

13. 核酸扩增装置，该装置具有350～380nm范围的波长的光照射功能。

14. 核酸扩增装置，该装置具有350～380nm范围的波长的光照射功能，该装置包括下述步骤：

步骤(a)：使发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的核酸分子特异性地形成杂交体，所述发夹探针包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类；

步骤(b)：对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接；

步骤(c)：将上述步骤(a)、(b)的反应产物供给核酸扩增反应。

15. 核酸扩增装置，该装置具有350～380nm范围的波长的光照射功能，该装置包括下述步骤：

步骤(a)：使发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的核酸分子特异性地形成杂交体，所述发夹探针包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类；

步骤(b)：对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接；

步骤(c)：在核酸扩增反应中进行上述步骤(a)、(b)。