[发明专利]制备积雪草提取物的方法

说明书

本发明涉及制备积雪草(Centella asiatica)提取物的方法，所述提取物包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物。

积雪草属于伞形科(Apiaceae)，具体而言是天胡荽亚科。该植物是已知的，并且已经被传统医学使用了3000年以上。对于它的愈合、镇静、止痛、抗抑郁和抗微生物特性，是很令人感兴趣的。

积雪草的活性化合物是五环三萜类，其为三萜苷配基类的形式：积雪草酸(式I)和羟基积雪草酸(式II)，或者为三萜异苷类的形式：积雪草皂苷(式III)、羟基积雪草苷(式IV)和Terminoloside(式V)。

Terminoloside是羟基积雪草苷的位置异构体，并且具有相同的糖链，即葡萄糖-葡萄糖-鼠李糖链。Terminoloside的萜环与Terminolic acid的萜环结构相当。

根据发明人的知识，目前还没有检测到积雪草皂苷的异构体。但是，可以假定存在积雪草皂苷的位置异构体，其具有与存在于羟基积雪草苷和Terminoloside之间的类似的异构现象。

积雪草的杂苷类，积雪草皂苷和羟基积雪草苷，是该植物中分别形成积雪草酸和羟基积雪草酸的储备形式的糖复合物。

三萜分子由于其调节和激活胶原合成的活性而令人关注。从积雪草中提取的苷配基和杂苷类特别是促进1型和3型胶原合成。这些活性物质主要用于促进愈合和治疗静脉功能不全的药物方面。它们也用于化妆品方面，作为抗皱纹和抗蜂窝组织剂。在现有技术中更普遍应用的积雪草的活性化合物是积雪草酸和羟基积雪草酸以及积雪草皂苷。

由于羟基积雪草苷在水中非常易溶，其通常在常规的脂溶性活性物质提取方法的过程中被清洗的水所带走。

国际申请WO 2004/062678提供了制备积雪草提取物的方法，所述提取物包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物，该方法包括通过液/液萃取、随后浓缩所得的水-醇相并连续过滤来选择性去脂的步骤，该顺序用于从羟基积雪草苷和Terminoloside的混合物中提取出积雪草皂苷。但是，羟基积雪草苷使一部分积雪草皂苷增溶，这部分残余的积雪草皂苷需要通过硅胶色谱来取出，而硅胶色谱是成本较高的纯化技术，在工业规模生产上并不常见。

令人惊奇地，发明人开发了新的提取方法，用于制备包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的积雪草提取物。在该方法中，发明人使用了新的步骤来纯化包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的溶液。

本发明涉及在吸附树脂上通过的步骤在制备包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的积雪草提取物中的应用。

本发明方法中使用的吸附树脂有利地是适合于吸附积雪草中包含的三萜杂苷类的树脂，例如苯乙烯-二乙烯基苯或者酚醛(formo-phenolic)型吸附树脂。

本发明还涉及制备包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的积雪草提取物的方法，该方法包括以下步骤：

α)将包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的水溶液通过吸附树脂，和

β)将所述吸附树脂用包含至少30%重量的醇溶剂和任选的水的洗脱剂洗脱。

在本说明书的范围内，术语“醇溶剂”是指包含至少一个-OH醇官能团的溶剂，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、甘油，更特别是甲醇和乙醇。

在步骤α)期间，将包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的溶液通过吸附树脂，使这些三萜异苷类能优先吸附。

在步骤β)中使用的洗脱剂任选地是未稀释的醇溶剂，或者有利的是醇溶剂和水的混合物，优选包含50%-80%的醇溶剂，优选60%-70%的醇溶剂。

在该方法的一个有利的备选方案中，在步骤α)之前进行步骤a)，用于通过水或包含至少10%重量的水和任选的醇溶剂的溶剂混合物来提取积雪草的地上部分，由此获得包含羟基积雪草苷、Terminoloside和积雪草皂苷的混合物的水溶液。

在本说明书的范围内，术语“积雪草的地上部分”是指积雪草叶，其由具有不超过5cm的叶柄的叶片组成。

使用该植物的地上部分有利地从积雪草植物中提取活性物质，主要目的是为了不破坏其根部，因此能够使这种多年生植物自然更新。

在本发明的方法的一个有利的备选方案中，提取步骤包括浸软步骤，在此期间，所述地上部分在搅拌下在水中或在包含水和任选的醇溶剂的溶剂混合物中被浸软。