[发明专利]产生自然杀伤细胞的方法

权利要求书

1.一种产生激活的自然杀伤（NK）细胞群体的方法，包括：

（a）将造血干细胞或祖细胞群体接种到包含白细胞介素-15（IL-15）并可选地包含干细胞因子（SCF）和白细胞介素-7（IL-7）中的一种或多种的第一培养基中，其中所述IL-15和可选的SCF和IL-7不包含在所述培养基的不明确的组分中，从而所述群体扩增并且所述造血干细胞或祖细胞群体内的多个造血干细胞或祖细胞在所述扩增期间分化为NK细胞；和

（b）将来自步骤（a）的所述细胞在包含干扰白细胞素-2（IL-2）的第二培养基中扩增，以产生激活的NK细胞群体。

2.一种产生激活的自然杀伤（NK）细胞群体的两步法，其中，所述方法的第一步包括在包含干细胞因子（SCF）、白细胞介素-7（IL-7）和白细胞介素-15（IL-15）中的一种或多种的第一培养基中扩增造血干细胞或祖细胞群体，并且其中所述SCF、IL-7和IL-15不包含在所述培养基的不明确的组分中，并且其中所述造血干细胞或祖细胞群体内的多个造血干细胞或祖细胞在所述扩增期间分化为NK细胞；和

其中所述方法的第二步包括在包含干扰白细胞素-2（IL-2）的第二培养基中扩增来自所述第一步的细胞，以产生激活的NK细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一培养基还包含Fms样酪氨酸激酶3配体（Flt3-L）、促血小板生成素（Tpo）、白细胞介素-2（IL-2）或肝素中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述第一培养基还包含胎牛血清或人血清。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述SCF在所述第一培养基中以约1至约150ng/mL的浓度存在。

6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述Flt3-L在所述第一培养基中以约1至约150ng/mL的浓度存在。

7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述IL-2在所述第一培养基中以约50至约1500IU/mL的浓度存在。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述IL-7在所述第一培养基中以约1至约150ng/mL的浓度存在。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述IL-15在所述第一培养基中以约1至约150ng/mL的浓度存在。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，所述Tpo在所述第一培养基中以约1至约150ng/mL的浓度存在。

11.根据权利要求3所述的方法，其中，所述肝素在所述第一培养基中以约0.1至约30U/mL的浓度存在。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述第二步中所述IL-2在所述第二培养基中以50至约1500IU/mL的浓度存在。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第二培养基另外包含胎牛血清（FCS）、转铁蛋白、胰岛素、乙醇胺、油酸、亚油酸、棕榈酸、牛血清白蛋白（BSA）和植物凝集素中的一种或多种。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述造血干细胞或祖细胞是CD34⁺。

15.根据权利要求1所述的方法，其中，所述造血干细胞或祖细胞包括来自人胎盘灌洗液的造血干细胞或祖细胞和来自脐带的造血干细胞或祖细胞，其中所述胎盘灌洗液和所述脐带血来自于相同胎盘。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（b）中的所述饲养细胞包括丝裂霉素C处理的外周血单核细胞（PBMC）、K562细胞或组织培养贴壁干细胞。

17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述NK细胞是CD3^-CD56⁺CD16^-。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述NK细胞另外是CD94⁺CD117⁺。

19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述NK细胞另外是CD161^-。

20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述NK细胞另外是NKG2D⁺。