[发明专利]用于维持血小板的功能的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及利用了N－羟基甲酰胺衍生物的用于维持血小板的功能的组合物、用于调制血小板的方法、包含血小板的血液制剂、以及用于维持血液制剂中的血小板的功能的方法。

背景技术

对于以白血病为代表的血液相关疾病的治疗，使治疗所需的量的血细胞稳定地增殖并供给是极其重要的，因此迄今为止很多研究者进行了想要使造血干细胞或造血前体细胞有效率地增殖的尝试。

已知在血细胞中巨核细胞为血小板前体细胞，即产生血小板的细胞，经过proplatelet(胞体突起)结构而产生血小板，在治疗性应用中处于重要位置。由于血小板在血液凝固(止血)中是必须的，因此在白血病、骨髓移植、抗癌治疗等中的需求极其高。

在血小板的生产中，迄今为止除了通过捐献者的献血进行采集的方法以外，还尝试了使用施与血小板生成素(TPO)的方法、使用从脐带血或骨髓细胞分化巨核细胞的方法等。最近，也尝试了使造血前体细胞在生物体外增殖，由这些前体细胞调制血小板的方法等。例如，本发明者等报告了由人胚胎干细胞(ES细胞)调制内包造血前体细胞的网状结构物，由该网状结构物比较大量并且有效率地进行血小板的产生的方法(专利文献1)、由人工多能性干细胞(iPS细胞)通过体外的培养体系而有效率地调制成熟巨核细胞和血小板的方法(专利文献2)等。

这样，虽然在细胞外调制血小板本身的方法的研究进展了，但是调制出的血小板的功能缺乏稳定性，因此需要开发出可大量地调制可耐受长期保存的功能的血小板的方法。

血小板与细胞外基质的结合在诱导血液凝固(止血、血栓形成等)方面是重要的过程。可以认为该过程通过血小板受体GPIb介由α亚基(GPIbα)而与血管性血友病因子(von Willebrand factor：VWF)结合来开始的。然而报告了，在37℃附近的条件下，金属蛋白酶的ADAM17(a disintegrinand metallopeptidase domain（去整合素和金属蛋白酶结构域）17)在GPIbα的胞外区脱落(Shedding，切割而除去)，从而GPIbα与VWF的会合被抑制，血小板的血液凝固功能消失(非专利文献1和非专利文献2)。

因此预想，为了保持在体外调制的血小板的功能，需要至少抑制ADAM17的活性。实际上，由本发明者等报告了通过时机良好地添加直接抑制金属蛋白酶活性的抑制剂(GM6001等)、或间接地抑制ADAM17等金属蛋白酶活性活化的p38MAP激酶抑制剂，从而可以保持在体外调制的血小板的功能(专利文献3)。

然而，GM6001等抑制剂不仅抑制ADAM17的活性，而且也抑制其它金属蛋白酶(特别是造血功能所必须的MMP9、MMP14)的活性，因此在利用了这些抑制剂的体外的血小板的调制中，需要在最多观察到血小板产生的一定时期添加这些抑制剂。在缺乏一致性和再现性的细胞培养中要求估计该时机等复杂的操作，因此利用了这些抑制剂的血小板的调制方法，在大量地调制功能性血小板这方面，特别是在血小板产生体系的工厂化中，仍然不充分。

此外认为，非选择性金属蛋白酶抑制剂，因为抑制膜型和游离型金属蛋白酶、ADAM等全部金属蛋白酶活性，因此通过在生物体内部的使用，从而有发挥各种副作用(由抑制作用于每个脏器的必须MMP或ADAM产生的弊病)的危险性。实际上，非选择性金属蛋白酶抑制剂由于会引起被称为肌肉骨骼综合征的严重副作用，因此这些多数抑制剂的开发已经中止(非专利文献3)。此外暗示出GM6001那样的具有异羟肟酸结构的抑制剂具有致突变性(非专利文献4)。因此，通过使用了上述抑制剂的方法而得到的血小板在安全性这样的方面也仍然不充分。

另一方面，现在，作为保存由生物体调制的血小板的方法，除了在20℃～24℃下一边搅拌一边保存的方法以外，不存在有效的方法，因此认为在为了保持血小板的功能而利用抑制ADAM17的金属蛋白酶活性的方法的情况下，在上述室温(20℃～24℃)条件下进行血小板的调制也是有效的。然而，迄今为止，关于在室温条件下，是否能够由脐带血或骨髓细胞分化成巨核细胞，此外，是否能够由来源于ES细胞等的造血前体细胞产生血小板，未经任何验证。

如上所述，现状是，能够作为用于维持血小板的功能的组合物的有效成分而实用化的化合物还未发现，因此，用于在体外取得功能上稳定的血小板的方法，特别是适于安全性高的血小板的大量生产的方法并未确立。现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2008/041370号

专利文献2：国际公开2009/122747号