[发明专利]稳定 GPCR 的功能构象状态的蛋白结合结构域及其用途

权利要求书

1.蛋白结合结构域，其能特异性结合GPCR的功能构象状态。

2.权利要求1的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域在结合后能稳定GPCR的功能构象状态。

3.权利要求1-2中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域在结合后能在GPCR中诱导功能构象状态。

4.权利要求1-3中任一项的蛋白结合结构域，其中所述GPCR的功能构象状态选自基础构象状态或活性构象状态或非活性构象状态。

5.权利要求1-4中任一项的蛋白结合结构域，其中所述GPCR的功能构象状态是活性构象状态。

6.权利要求1-5中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域能特异性结合与激动剂结合的GPCR和/或增强GPCR对激动剂的亲和性。

7.权利要求1-6中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域在结合后能增强GPCR的功能构象状态的热稳定性。

8.权利要求1-7中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域能特异性结合所述GPCR的功能构象状态的构象表位。

9.权利要求8的蛋白结合结构域，其中所述构象表位是细胞内表位。

10.权利要求8-9中任一项的蛋白结合结构域，其中所述构象表位包含于用于下游信号传导蛋白的结合位点中。

11.权利要求8-10中任一项的蛋白结合结构域，其中所述构象表位包含于G蛋白结合位点中。

12.权利要求1-11中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含4个构架区和3个互补决定区或其任何合适的片段。

13.权利要求1-12中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域来源于骆驼抗体。

14.权利要求1-13中任一项的蛋白结合结构域，其中所述蛋白结合结构域包含纳米抗体序列或其任何合适的片段。

15.权利要求14的蛋白结合结构域，其中所述纳米抗体包含选自SEQ ID NO:1-29的序列或其任何合适的片段。

16.权利要求1-15中任一项的蛋白结合结构域，其中所述GPCR是哺乳动物蛋白或植物蛋白或微生物蛋白或病毒蛋白或昆虫蛋白。

17.权利要求16的蛋白结合结构域，其中所述哺乳动物蛋白是人蛋白。

18.权利要求1-17中任一项的蛋白结合结构域，其中所述GPCR选自GPCR谷氨酸家族的GPCR、GPCR视紫红质家族的GPCR、GPCR粘附家族的GPCR、GPCR Frizzled/Taste2家族的GPCR以及GPCR分泌素家族的GPCR。

19.权利要求1-18中任一项的蛋白结合结构域，其中所述GPCR是肾上腺素能受体，如α肾上腺素能受体或β-肾上腺素能受体，或其中所述GPCR是毒蕈碱受体，如M1毒蕈碱受体或M2毒蕈碱受体或M3毒蕈碱受体或M4毒蕈碱受体或M5毒蕈碱受体，或其中所述GPCR是血管紧张素受体，如血管紧张素II1型受体或血管紧张素II2型受体。

20.复合体，包含(i)蛋白结合结构域，(ii)功能构象状态的GPCR，以及(iii)任选存在的受体配体。

21.权利要求20的复合体，包含(i)权利要求1-19中任一项的蛋白结合结构域，(ii)功能构象状态的GPCR，以及(iii)任选存在的受体配体。

22.权利要求20-21中任一项的复合体，其中所述受体配体选自小分子、蛋白、肽、蛋白支架、核酸、离子、碳水化合物或抗体或其任何合适的片段。

23.权利要求20-22中任一项的复合体，其中所述复合体采用溶解的形式或固定化于固相支持物。

24.权利要求20-23中任一项的复合体，其中所述复合体是晶体。

25.晶体形式的复合体，包含(i)蛋白结合结构域,(ii)功能构象状态的GPCR，以及(iii)任选存在的受体配体，其中所述晶体形式是通过使用权利要求1-19中任一项的蛋白结合结构域获得的。