[发明专利]用于制备重组人生长激素的改良方法有效
| 申请号： | 201180045528.5 | 申请日： | 2011-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN103119056A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 多夫·坎纳;埃利·施梅尔 | 申请（专利权）人： | 辉凌公司 |
| 主分类号： | C07K14/61 | 分类号： | C07K14/61;C12N1/20;C12N1/38 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 张莹 |
| 地址： | 荷兰霍*** | 国省代码： | 荷兰;NL |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 制备 重组 人生 激素 改良 方法 | ||
1.一种用于制备人生长激素(hGH)的方法，所述方法包括：
(i)发酵生产人生长激素(hGH)的大肠杆菌(E.coli)细胞；
(ii)从所述大肠杆菌细胞回收包含体，并将所述回收的包含体在碱性pH溶解以提供溶解的hGH；
(iii)任选地冻干溶解的hGH；
其特征在于，所述发酵在包含锰、锌、钴、钼、钙、铜和硼作为痕量元素的培养基中进行。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基包含基于所述培养基的总体积的以下浓度的痕量元素：
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述痕量元素以痕量元素溶液的形式添加至所述培养基中。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述痕量元素溶液包含1g/L一水合硫酸锰，和/或其中所述痕量元素溶液包含约2.8g/L七水合硫酸锌，和/或其中所述痕量元素溶液包含2g/L六水合氯化钴，和/或其中所述痕量元素溶液包含2g/L二水合钼酸钠，和/或其中所述痕量元素溶液包含3g/L二水合氯化钙，和/或其中所述痕量元素溶液包含1.85g/L五水合硫酸铜，和/或其中所述痕量元素溶液包含0.5g/L硼酸。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述痕量元素溶液包含1g/L一水合硫酸锰、2.78g/L七水合硫酸锌、2g/L六水合氯化钴、2g/L二水合钼酸钠、3g/L二水合氯化钙、1.85g/L五水合硫酸铜和0.5g/L硼酸。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述碱性pH为约10至约12.5。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述碱性pH为约12。
8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(ii)不包括使用还原剂和离液剂。
9.一种用于减少在制备人生长激素(hGH)的过程中形成的人生长激素聚合形式的量的方法，所述方法包括：
(i)发酵生产人生长激素的大肠杆菌细胞；
(ii)从所述大肠杆菌细胞回收包含体，并将所述回收的包含体在碱性pH溶解以提供溶解的hGH；
(iii)任选地冻干溶解的hGH；
其特征在于，所述发酵在包含锰、锌、钴、钼、钙、铜和硼作为痕量元素的培养基中进行。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养基包含基于所述培养基的总体积的以下浓度的痕量元素：
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述痕量元素以痕量元素溶液的形式添加至所述培养基中。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述痕量元素溶液包含1g/L一水合硫酸锰，和/或其中所述痕量元素溶液包含约2.8g/L七水合硫酸锌，和/或其中所述痕量元素溶液包含2g/L六水合氯化钴，和/或其中所述痕量元素溶液包含2g/L二水合钼酸钠，和/或其中所述痕量元素溶液包含3g/L二水合氯化钙，和/或其中所述痕量元素溶液包含1.85g/L五水合硫酸铜，和/或其中所述痕量元素溶液包含0.5g/L硼酸。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述痕量元素溶液包含1g/L一水合硫酸锰、2.78g/L七水合硫酸锌、2g/L六水合氯化钴、2g/L二水合钼酸钠、3g/L二水合氯化钙、1.85g/L五水合硫酸铜和0.5g/L硼酸。
14.根据权利要求9所述的方法，其中所述碱性pH为约10至约12.5。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述碱性pH为约12。
16.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(ii)不包括使用还原剂和离液剂。
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