[发明专利]用于多种参数的对照核酸

权利要求书

1.一种用于分离及同时扩增可能存在于一份或多份流体样品中的至少第一和第二靶核酸的方法，所述方法包括下列自动化步骤：

a.向每份所述流体样品添加内部对照核酸，

b.在一个或多个容器中将固体支持材料和所述一份或多份流体样品于一定条件下组合在一起达一段时间，该条件和时间段足以允许包含所述靶核酸和所述内部对照核酸的核酸在所述固体支持材料上固定化，

c.在分离站中将所述固体支持材料与存在于所述流体样品中的其它材料分离，

d.在所述分离站中纯化所述核酸，并将所述固体支持材料用清洗缓冲液清洗一次或多次，

e.在至少两个反应容器中使纯化的靶核酸和纯化的内部对照核酸与一种或多种扩增试剂接触，所述扩增试剂包含针对每一种所述靶核酸和针对所述内部对照核酸的至少一组独特引物，其中至少第一反应容器至少包含所述第一靶核酸，且至少第二反应容器至少包含所述第二靶核酸，且其中所述第二靶核酸不存在于第一反应容器中，

f.在所述反应容器中将所述纯化的靶核酸和所述纯化的内部对照核酸与所述一种或多种扩增试剂在一定条件下一起温育一段时间，所述条件和时间段足以发生指示所述靶核酸存在或缺乏的扩增反应，

g.检测并测量由所述靶核酸的扩增产物生成并与所述靶核酸的浓度成比例的信号，以及检测并测量由所述内部对照核酸生成的信号，

其中步骤d.至g.中用于扩增和检测的条件对于所述至少第一和第二纯化的靶核酸和所述内部对照核酸是相同的，且其中所述内部对照核酸的序列对于所述至少第一和第二纯化的靶核酸是相同的。

2.权利要求1的方法，其中所述内部对照核酸的扩增产物的存在即使在缺乏一种或多种所述靶核酸的扩增产物的情况中指示反应混合物中发生扩增。

3.前述权利要求中任一项的方法，进一步包括以下步骤：

h.测定一种或多种所述靶核酸的数量。

4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述扩增试剂包含具有逆转录酶活性的聚合酶，所述方法在步骤e.和步骤f.之间进一步包括以下步骤：在所述反应容器中将所述纯化的核酸与所述一种或多种扩增试剂在一定的条件下一起温育一段时间，该条件和时间段适合于通过所述具有逆转录酶活性的聚合酶发生RNA转录。

5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸是DNA。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸是RNA。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸是装甲核酸。

8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的序列不同于存在于所述流体样品中的其它核酸的序列。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的序列自天然存在的基因组衍生。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的序列是混杂的。

11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的解链温度是从50°C至90°C。

12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸具有多至500个碱基的长度。

13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的序列具有30%至70%的GC含量。

14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸具有介于LOD和20倍LOD之间的浓度。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中所述内部对照核酸具有介于20倍LOD和5000倍LOD之间的浓度。

16.前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤a.中添加超过一种内部对照核酸，但是在步骤f.中仅扩增所述内部对照核酸中的一种。