[发明专利]具有改良的连接体的鹅膏毒素轭合物

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗。在一个方面，本发明涉及鹅膏毒素(amatoxin)与靶结合部分(target-binding moiety)例如抗体的轭合物，所述鹅膏毒素与靶结合部分通过包含脲部分的连接体连接，其用于癌症的治疗中。在另一方面，本发明还涉及包含该轭合物的药物组合物。

背景技术

鹅膏毒素是由8个氨基酸组成的环肽。它们可从鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蕈类分离或合成制备。鹅膏毒素特异性抑制哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II并且由此还抑制受影响细胞的转录和蛋白生物合成。细胞中转录的抑制导致生长和繁殖的停止。尽管不是共价连接，但是鹅膏毒素与RNA聚合酶II之间的络合是非常紧密的(K_D＝3nM)。将鹅膏毒素从酶上解离是非常缓慢的过程，因此使得受影响的细胞不可能恢复。当转录抑制持续太久时，细胞将经历程序性细胞死亡(细胞凋亡)。

已经在1981年通过用经由偶氮化与Trp(氨基酸4；参见图1)的吲哚环连接的连接体将抗Thy1.2抗体与α-鹅膏毒素偶联而开发了鹅膏毒素作为细胞毒素部分用于肿瘤治疗的用途(Davis & Preston，Science 1981，213，1385-1388)。

专利申请EP1 859 811 A1(2007年11月28日公开)描述了一种轭合物，其中，β-鹅膏毒环肽的鹅膏毒素氨基酸1的γC原子直接(即无连接体结构)与白蛋白或单克隆抗体HEA125、OKT3或PA-1偶联。而且，这些轭合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7)、伯基特淋巴瘤细胞(Raji)和T淋巴细胞(Jurkat)的增殖的抑制作用。虽然该申请中建议使用连接体，包括包含单元例如酰胺、酯、醚、醇醚、二硫化物、脲、硫脲、烃部分以及类似部分的连接体，但是并没有实际上给出这样的结构，且没有提供更多的详细内容例如在鹅膏毒素上的连接位点。

已知鹅膏毒素在与大的生物分子载体例如抗体分子偶联时是相对无毒的并且它们仅在生物分子载体被切除之后才显现它们的细胞毒性。考虑到鹅膏毒素的毒性，尤其是对肝细胞的毒性，最重要的是用于靶定的肿瘤治疗的鹅膏毒素轭合物在血浆中施用之后保持高度稳定并且在靶细胞中鹅膏毒素的释放在内化之后发生。在这一背景下，轭合物稳定性的微小的改良可对用于治疗途经的鹅膏毒素轭合物的治疗窗和安全性带来显著的结果。

发明目的

因此，本领域中有对在血浆中稳定而尽量减小对非靶细胞的有害副作用的靶向结合部分鹅膏毒素轭合物的高度需要。

发明内容

在第一方面，本发明涉及一种轭合物，其包含经由连接体L与鹅膏毒素相连的靶结合部分，其中，所述连接体L经由下列(i)、(ii)或(iii)与鹅膏毒素连接：

(i)鹅膏毒素氨基酸1的γC原子，特别是经由酰胺键；

(ii)与鹅膏毒素氨基酸3的δC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；

(iii)鹅膏毒素氨基酸4的6′C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6′C原子结合的氧原子；

在每种情况下，所述连接体L经由脲部分与靶结合部分连接。

在第二方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的轭合物。

在另一个方面，本发明涉及一种鹅膏毒素-轭合分子，其包含经由下列(i)、(ii)或(iii)与鹅膏毒素相连的连接体L：

(i)鹅膏毒素氨基酸1的γC原子，特别是经由酰胺键；

(ii)与鹅膏毒素氨基酸3的δC原子结合的氧原子，特别是经由酯键、醚键或氨基甲酸酯键；

(iii)鹅膏毒素氨基酸4的6′C原子，特别是经由与鹅膏毒素氨基酸4的6′C原子结合的氧原子；

在每种情况下，所述连接体L包含氨基甲酸衍生的-NH-C(O)-X，其中X是可以被靶结合部分的伯胺替代的离去基团。

在再一个方面，本发明涉及合成本发明的轭合物的方法，其包括将本发明的鹅膏毒素轭合分子与包含伯氨基基团的靶结合部分反应的步骤。

附图说明

图1显示不同鹅膏毒素的结构式。黑体数字(1至8)标明形成鹅膏毒素的八个氨基酸的标准编号。还显示了氨基酸1、3和4中的原子的标准标号(分别为希腊字母α至γ、希腊字母α至δ和从1’至7’的数字。)

图2显示BrdU分析中使用不同连接体部分的不同鹅膏毒环肽赫赛汀轭合物对SKOV-3细胞在孵育72小时后的细胞毒性。