[发明专利]荧光测定法

说明书

本发明涉及荧光测定法，且具体地涉及用于样本中荧光的时延检测的方法和设备，例如用于一种临床环境。

使用荧光的技术可用于生物分子的检测。各种涉及以这种方式检测荧光的技术已为人所知，例如，如Connally等人在“用于时间选通发光显微镜检法的高强度固态紫外源（High Intensity Solid-State UV Source for Time-Gated Luminescence Microscopy）”细胞计量术A69A部分：1020-1027，2006中所披露的，其中，描述了一种基于紫外（UV）LED的系统，该系统用于检测包括镧系元素螯合物的探针中的荧光。此类荧光探针具有长荧光寿命，这使它们的检测能够与具有非常短寿命的背景荧光区分开来。通常，为了区分探针荧光和背景荧光，在一段采集时期内，可以从一个样本上检测到一个光信号，该采集时期在该背景荧光有效地消失时开始。

在Connally等人中，使用了一种利用电触发UV LED和摄像机的光学装置，在沿提供至该LED的激励信号的下降沿的一段拖延时期后触发该摄像机。也提到了早期时间选通仪器，其中，斩波器盘被用作廉价的脉冲激励源。由于脉冲轮廓具有缓慢的上升和下降沿并在分辨率和敏感度上有限制，Connally等人提到这种早期仪器是不利的。斩波器盘的其他明显限制因素包括该脉冲方式的不灵活性质、光能的低使用率以及由于驱动电机振动引起的图像模糊风险。当该荧光探针的浓度低时，例如，当其在临床样本中下被用于检测低丰度生物分子时，噪声和敏感度不足是特别的问题。

Greinert等人在生物化学和生物物理方法期刊，1（1979）77-83，“E式延迟荧光去极化，一种在微秒范围内用探针探查旋转运动的技术（E-Type Delayed Fluorescence Depolarization,A Technique to Probe Rotational Motion in the Microsecond Range）”中披露了使用一个斩波器盘的机械选通荧光计的示例，其中，一种脉冲氮激光器用于照亮样本，并且斩波器盘用于阻挡早期荧光发射并使得一延迟部分能够穿过一个光电倍增管。Marriott等人在“时间分辨成像显微法（Time resolved imaging microscopy）”，生物物理学，期刊，60卷，1991年12月，1374-1387页中披露了另一个示例，其中，两个锁相斩波器和一个慢扫描CCD摄像机附装在一个荧光显微镜上，样本被一个光脉冲周期序列照亮，且各激励期结束后，在定义的时间间隔内记录一张图像。

US4,954,714中披露了一种机械选通荧光计的另一个示例，其中，一个斩波器装置与一个摄像机结合使用，该斩波器防止摄影胶片暴露在背景荧光下并与光源的闪光频率相协调以保证该胶片只暴露在延迟荧光辐射下。

如Connally等人所述的，现有机械选通荧光计系统的一个问题在于脉冲沿上升和下降缓慢，此问题可使具有短寿命的荧光探针的检测更加困难。另一个问题涉及需要将这些机械组件和透镜系统结合进一个荧光计系统的设备的尺寸和复杂性，该问题可防止此类系统被用于受控实验室以外的环境中，例如用于空间更受限制的医院床边环境等临床环境内。这种机器的操作也可能是复杂的，并且需要专家或高度熟练的操作员。需要进行各种试验以保证可靠性并满足质量控制要求。这些问题的结果是，临床样本通常被移至一个实验室进行分析，且获得分析结果太晚而不能通知临床决策，特别是在急救护理上。

另一个问题涉及复杂系统的使用，无论是机械的还是电气的/电子的，这些复杂系统用于使光源发出的光与由一个检测器检测的光同步（或，在US4,954,714,案例中，一个感光胶片），这样只有该延迟荧光被检测到。US'714中，通过将一个用于光发射的斩波器和一个用于光检测的斩波器结合进一个共用斩波器盘内一定程度上解决了此问题，虽然这只部分地解决了所用设备的尺寸问题，且未解决（和可能突出）与引起图像模糊的电机振动相关的问题，或者使用电子光传感器情况下的问题，可能来自该电机的影响该光检测器的噪声。

本发明的目的是解决以上所提到的问题中的一个或多个问题。

本说明书中的明显先前发布的文件的列表和讨论不必视为对该文件是本领域状态的一部分或者是公共常识的承认。

根据本发明的一个第一方面提供了一种荧光计，该荧光计包括：

一个光源；

一个光检测器；

一个安置在该光源和该光检测器之间的样本容器；

一个电机；以及