[发明专利]细胞片叠层化物的制造方法、由该方法得到的具有血管网的细胞片叠层化物及其利用方法

说明书

技术领域

本发明涉及在医学、生物、药物开发、药学等领域有用的细胞片叠层化物的制造方法、由该方法得到的具有血管网的细胞片叠层化物及其利用方法。本申请是主张2010年9月14日提出的日本申请(日本特愿2010-225200)为基础的优先权的申请。

背景技术

今天，动物细胞培养技术显著进步，以动物细胞为对象的研究开发也广泛在各种领域被实施。成为对象的动物细胞的使用方法也不仅是开发当初的将细胞本身制品化、将其产生物制品化，现在通过分析细胞和/或其细胞表层蛋白质来设计有效的药物、将患者本人的细胞在活体外再生、或者提高其功能然后送回活体内进行治疗等方式也在逐渐被实施。现在，动物细胞的培养技术、以及评价、分析、利用的技术是研究者关注的一个领域。但是，包含人细胞在内，动物细胞大多是附着依赖性的。即，要在活体外培养动物细胞时，需要使它们一次性附着于基材表面。并且，不能将培养的细胞剥离成一个一个，还需要保持在该基材表面上培养的形态使其剥离。

特别对于使患者本人的细胞在活体外再生的技术而言，近年来，将治疗困难的脏器替换成他人的脏器的脏器移植已经一般化。成为对象的脏器也实际上多样化为皮肤、角膜、肾脏、肝脏、心脏等，另外，术后恢复也特别良好，作为一种医疗技术已经逐渐被确立。作为一例列举角膜移植，约50年前日本也设立眼库开始了移植活动。然而，据说供体数尚且少，仅国内每年需要角膜移植的患者约由2万人，与此相对，实际进行移植治疗的患者仅为约1/10的2000人左右。虽然有角膜移植这样基本确立的技术，但由于供体不足这样的问题，现状是要求其他的医疗技术。基于这样的背景，开发了要将患者本人的正常细胞培养至所需大小将其移植的技术。

日本特开平02-211865号公报(专利文献1)显示了在用对水的上限或者下限临界溶解温度为0～80℃的聚合物包覆了基材表面而得的细胞培养支撑体上，将细胞在上限临界溶解温度以下或下限临界溶解温度以上培养，然后调整到上限临界溶解温度以上或下限临界溶解温度以下，从而无酶处理而剥离培养细胞的新的细胞培养法。另外，日本特开平05-192138号公报(专利文献2)记载了，通过利用该温度应答性细胞培养基材将皮肤细胞在上限临界溶解温度以下或者下限临界溶解温度以上培养，然后调整至上限临界溶解温度以上或者下限临界溶解温度以下，从而以低损伤剥离培养皮肤细胞。通过利用温度应答性细胞培养基材，可以对现有的培养技术谋求各种新的展开。进而，日本再表02-008387号公报(专利文献3)中发现，在用温度应答性聚合物包覆了基材表面的细胞培养支撑体上培养心肌组织的细胞，得到心肌样细胞片，然后，使培养液温度为上限临界溶解温度以上或下限临界溶解温度以下，使培养的多层化细胞片粘附于聚合物膜，直接与聚合物膜一起剥离，并且用规定的方法使其3维结构化，从而可以构建结构缺陷少、作为活体外(in vitro)的心肌样组织具有数种功能的细胞片、和3维结构。然而，在上述的现有技术中，心肌样细胞片的叠层化不能无限进行，3层左右为极限，强烈要求能够简便地多次叠层化的技术。

为了解决如上问题，FASEB.J.，20(6)，708-710(2006)(非专利文献1)中尝试了在活体内将细胞片叠层化，显示得到了1mm厚的心肌片叠层化物。其中，已知为了获得有厚度的细胞片叠层化物，必须向被叠层化的各细胞或者各细胞片供给营养和/或氧，但在FASEB.J.，20(6)，708-710(2006)(非专利文献1)的方法中，需要反复向活体内移植细胞片，其必须相应于其次数地将移植部位开口，是对于被移植侧强加了大的负担的方法，强烈要求解决该课题的、能够简便地多次叠层化的技术。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特开平02-211865号公报

专利文献2:日本特开平05-192138号公报

专利文献3:日本再表02-008387号公报

非专利文献

非专利文献1:FASEB.J.，20(6)，708-710(2006)

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的是解决如上所述的关于细胞片的叠层化的问题。即，本发明提供基于与现有技术完全不同想法创造的新的细胞片叠层化物的制造方法、由该方法得到的具有血管网的细胞片叠层化物及其利用方法。

用于解决课题的方法