[发明专利]抗单链IV型胶原多肽抗体和包含其的用于诊断、预防或治疗肿瘤的药物或药剂

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，其结合作为单链形式的IV型胶原基因产物分泌的单链IV型胶原多肽，并且抑制表达单链IV型胶原多肽的肿瘤组织的生长。本发明也涉及包含该单克隆抗体的用于肿瘤的药物和诊断、预防或治疗的药物。

背景技术

活组织由为生命单位的细胞和存在于细胞周围或之间的细胞外基质组成。细胞外基质是大的蛋白复合体，其主要由糖修饰的蛋白比如胶原、层粘连蛋白、弹性蛋白和蛋白聚糖组成。胶原占生物蛋白的约30%并且主要见于结缔组织中。而且，胶原组成上皮组织和结缔组织之间的边界处或内皮组织和结缔组织之间边界处的基膜。已知细胞外基质的功能是参与控制细胞生长和/或分化。细胞外基质和细胞之间的相互作用已经显示对于正常组织的发育、修复、再生等是重要的。

也已经显示，细胞外基质和细胞之间的该相互作用对于肿瘤形成期间肿瘤细胞生长和血管发生起到重要的作用。通过细胞外基质的反复降解和重塑，肿瘤细胞重建细胞外微环境。结果，促进肿瘤细胞的生长或新生血管的形成以使得肿瘤组织生长。而且，已知由于这种重塑的细胞外基质的降解，发生肿瘤细胞的侵袭和/或转移。

已知胶原包括基因型不同的20或更多种类型。例如，I型胶原主要存在于由成纤维细胞、间质细胞等组成的结缔组织，而IV型胶原主要存在于基膜中。

除了成纤维细胞或间质细胞之外，IV型胶原还从多种细胞比如上皮细胞和内皮细胞分泌。这样分泌的IV型胶原分子被认为彼此缔结以构建具有网结构的基膜骨架。正常组织的基膜在上皮组织和间质组织之间的边界处、内皮组织和间质组织之间的边界处等存在，并且调节组织形态学和功能。

胶原分子具有松弛的右手三螺旋结构，其由三条多肽链一起组成，每条链具有左手螺旋构象。IV型胶原包括6种基因型。已知衍生自这6种基因的α1至α6多肽链，并且考虑其不同组合以形成3种或更多种类型的分子种类。最广泛可见的基膜由IV型胶原分子的聚集体组成，每条聚集体具有通过分子间二硫键交联的2条α1多肽链和1条α2多肽链。相对照，由α3至α6多肽链组成的IV型胶原分子仅仅可见于有限数量组织的基膜中。

如上述，IV型胶原指三聚体分子——其具有由通过分子间二硫键交联的3条α多肽链形成的三螺旋结构，或这些三聚体分子的聚集体。一般而言，已知IV型胶原被细胞外分泌为三聚体分子以在细胞外形成聚集体。但是，本发明人已经发现培养的人细胞分泌IV型胶原以及其单多肽链(下文，也称为“单链IV型胶原多肽”)，其即没有分子间二硫键也不采取螺旋结构(见NPL1)。具体而言，在不含维生素C的培养基中培养的细胞产生的单链IV型胶原多肽的量比IV型胶原的量大得多(见NPL2)。而且，已知IV型胶原通过降解蛋白的酶(明胶酶、基质金属蛋白酶-2等)经历降解。因为缺乏螺旋结构，单链IV型胶原多肽比具有三螺旋结构的IV型胶原更容易由降解酶降解。所以，已经假定全长单链IV型胶原多肽难以在体内检测。然而，本发明人已经在人胎盘中发现单链IV型胶原多肽(见NPL3)。

本发明人已经进一步揭示从细胞分泌的单链IV型胶原多肽经历不同于IV型胶原的翻译后修饰。已知IV型胶原中的脯氨酸羟基化和赖氨酸羟基化参与三螺旋结构的形成和/或稳定，而与IV型胶原相比，单链IV型胶原多肽中的脯氨酸羟基化和赖氨酸羟基化程度更低。另外，单链IV型胶原多肽与二孢蘑菇(Agaricus bisporus)凝集素(ABA)——识别糖链Galβ1-3GalNAc的凝集素——反应，而IV型胶原不与ABA凝集素反应。

如上述，单链IV型胶原多肽的化学结构不同于由于其变性而产生的IV型胶原或多肽的化学结构。因此推定单链IV型胶原多肽的生物功能不同于IV型胶原的生物功能。

实体瘤为了其生长需要新生血管。由于该原因，抑制血管发生是抑制肿瘤生长的方法之一。IV型胶原具有胶原的和非胶原的区域。据报道，包含在C-端非胶原的区域的多肽Arresten抑制腔形成并且抑制血管发生，导致肿瘤生长的抑制(见NPL4)。

已经报道，JK199(见PTL1)和包含在血清中IV型胶原的测试试剂盒中的抗体(见NPL5、NPL6和PTL2)作为抗IV型胶原的单克隆抗体。

另外，已经报道作用于“隐藏胶原位点(cryptic collagen site)”的抗体(见PTL3)作为抗变性的IV型胶原的单克隆抗体。但是，其既没有公开也没有暗示这些抗体识别细胞外分泌和稳定存在的单链IV型胶原多肽。