[发明专利]HLA-G同种型用于骨吸收相关疾病的治疗

说明书

技术领域

本发明涉及HLA-G同种型作为限制骨吸收的试剂用于治疗例如骨质疏松症的一种新型用途。

背景技术

主要组织相容性复合物（MHC，法文为CMH）抗原被分为几类：Ｉ类抗原（HLA-A、-B和-C），其具有3个球形结构域（α1、α2和α3），且其α3结构域与β2微球蛋白相关，II类抗原（HLA-DP、-DQ和-DR）和III类抗原（补体）。除了上面提到的抗原以外，I类抗原还包括其它的命名为非经典的I类抗原的（Ib类）抗原，并且，更具体地，是HLA-E、HLA-F和HLA-G（Carosella等人，2008a）。

HLA-G基因（也称作HLA-6.0基因）的核苷酸序列已被Geraghty等人(1987)描述了：其包括4396个碱基对并表现出与HLA-A、-B和-C基因的内含子/外显子组织同源的内含子/外显子组织。这种HLA-G基因包括8个外显子、7个内含子和一个非翻译3'端。其不同于编码I类抗原的其它基因，因为同相（en phase）翻译终止密码子位于外显子6的第二个密码子水平处；因而，此基因编码的蛋白的胞质区域比HLA-A、-B和-C蛋白的胞质区域短。Ishitani和Geraghty（1992）已经表明，HLA-G基因的初级转录物可以以几种方式被剪接，并生成至少3种不同的成熟mRNA：HLA-G初级转录物提供了1200bp的完整拷贝G1、900bp的片段(G2)和600bp的片段(G3)。G1转录物不包括外显子7，且对应于Ellis(1990)描述的序列，就是说，其编码含有信号序列、三个外部结构域、跨膜区和胞质序列的蛋白。G2mRNA不包含外显子3，就是说其编码在其中α1和α3结构域直接连接的蛋白。G3mRNA既不含有外显子3又不含外显子4，就是说其编码在其中α1结构域和跨膜序列直接连接的蛋白。被用来产生G2抗原的剪接导致了腺嘌呤（A）（获自α1编码结构域）与腺嘌呤-胞嘧啶（AC）序列（源于α3编码结构域）的结合，其导致AAC（天冬酰胺）密码子的产生，取代了存在于编码HLA-G1中α3结构域的序列5’位置中的GAC（天冬氨酸）密码子。用于产生HLA-G3的剪接并没有引起剪接区域中新密码子的形成。

还已表明HLA-G mRNA的其它剪接形式的存在：不包含外显子4的G4转录物；G5转录物，其在外显子4和5之间包括内含子4，从而在此转录物的翻译期间引起阅读框的改变，特别是在内含子4的氨基酸21后出现一个终止密码子；G6转录物，其具有内含子4，但缺失外显子3；以及最后的G7转录物，其包含内含子2，从而在此转录物的翻译期间引起阅读框的改变，且在内含子2的氨基酸2后出现一个终止密码子（Kirszenbaum等人，1994和1995；Moreau等人，1995；专利申请EP0677582)。

因而，至少有7种不同的HLA-G mRNA，其编码HLA-G的7种同种型，其中4个是细胞膜同种型（HLA-G1、-G2、-G3和-G4），以及3个可溶性同种型（HLA-G5、-G6和-G7）（Carosella等人，2008b）。

HLA-G起初被描述为在胎盘屏障水平、在胎母界面处被滋养层所特异性剪接（Carosella等人，2008a）。其最近还在胸腺、角膜、内皮前体、间质干细胞（也称作骨髓间质细胞或骨髓多能间质细胞，并命名为MSC或CSM）以及正常或肿瘤成骨细胞中检测到（Deschaseaux等人，2009a）。但是，事实上在身体的所有细胞中都检测到基础水平的HLA-G mRNA，其可被扩增，并在DNA脱甲基化剂、一些细胞因子如IFN（干扰素）、应激因子或缺氧的作用下被诱导翻译成蛋白（Carosella等人，2008a）。因而，在特定的条件下，如组织移植、某些肿瘤或炎症反应的发展时，HLA-G蛋白可以在正常条件下不表达HLA-G蛋白的组织中表达。在血液中，同时发现了从膜上脱离下来的膜同种型如HLA-G1（其此后被称为HLA-G1s，对应于“HLA-G1脱落”）和其它可溶性同种型。

迄今为止，HLA-G有别于其它I类HLA分子，比如：

-其表达仅限于某些组织，

-其展现出非常小的多态性（编码15个蛋白变体的44个等位基因），这归因于众多沉默突变，以及

-其诱导免疫耐受。