[发明专利]莱姆病的诊断方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年9月27日提交的美国临时专利申请号61/386,694的优先权，其公开的内容通过引用并入本文。

发明领域

本发明主要涉及莱姆病的诊断，更具体地，本发明涉及在哺乳动物，如马和犬中确定莱姆病的不同阶段。

发明背景

莱姆病是由伯氏疏螺旋体广义型的螺旋体感染导致。这是一种人畜共患病，影响人、犬、马和其他哺乳动物种属。所述细菌通过被感染的蜱（硬蜱属）传播给哺乳动物宿主。莱姆病是美国、欧洲和亚洲最常见的媒传疾病。在欧洲和亚洲该疾病通常由伽氏疏螺旋体（B.Garinii）和阿氏疏螺旋体（B.Afzelii）引起，而在美国存在伯氏疏螺旋体的狭义菌株。在目前莱姆病的诊断方法中，通常对针对完整伯氏疏螺旋体裂解物或针对螺旋体单个抗原的血清抗体进行分析，以便对同病原体接触并存在发病风险的犬和马进行鉴定。在犬和马中，可以依次使用ELISA和Western印迹（WB）对血清中的伯氏疏螺旋体抗体进行检测，该方法并不完善，但尽管如此仍被认为是人莱姆病诊断的黄金标准。尽管某些检测是可用的（如用于检测犬和马伯氏疏螺旋体不同表面抗原VlsE的恒定结构域IR6的snap检测），但是其缺乏所需的灵敏度水平以及无法对所述疾病的不同阶段进行区分。因而，始终需要在哺乳动物，包括但不限于在马和犬中诊断莱姆病的改进的方法，这样的需求尚未满足。本发明则满足了这些和其他需求。

发明概述

本发明提供了一种在哺乳动物中诊断莱姆病状况的方法。所述方法包括在获取自或衍生自哺乳动物的生物样品中，测定存在或不存在伯氏疏螺旋体（B.burgdorferi）外表面蛋白（Osp）OspA、OspC、和OspF的抗体，并根据所述抗体的存在或不存在鉴定所述哺乳动物已被或未被伯氏疏螺旋体感染。所述方法包括测定所述动物是否已接种了抗伯氏疏螺旋体疫苗。所述方法可以根据测定存在或不存在所述抗体，区分莱姆病的不同阶段，即早期、中期或慢性伯氏疏螺旋体感染。在一个实施方式中，通过测定不存在针对OspA、OspC和OspF抗原的抗体，鉴定所述哺乳动物未被伯氏疏螺旋体感染。在一个实施方式中，在所述方法中测定的针对伯氏疏螺旋体抗原的仅有的抗体是针对伯氏疏螺旋体OspA、OspC、和OspF的抗体。

所述方法适于使用任意适宜的系统或设备测定存在或不存在所述抗体。在不同实施方式中，使用横流装置或基于荧光珠的多重检测测定所述抗体。

本发明包括检测伯氏疏螺旋体OspA、OspC、和OspF抗体的测定水平，并根据OspA、OspC、和OspF抗体的测定水平与参比值的比较结果，鉴定所述哺乳动物已接种抗伯氏疏螺旋体疫苗和/或具有早期、中期或慢性伯氏疏螺旋体感染。在一个实施方式中，所述参比值为平均荧光强度值的范围。

在本发明的一个特定方面，所述方法包括：

i）根据测定存在针对OspA的抗体且不存在针对OspC或OspF的抗体，鉴定所述哺乳动物已接种但并未被伯氏疏螺旋体感染；

ii）根据测定存在针对OspC的抗体且不存在针对OspA和OspF的抗体，鉴定所述哺乳动物具有早期伯氏疏螺旋体感染；

iii）根据测定存在针对OspF的抗体且不存在针对OspA和OspC的抗体，鉴定所述哺乳动物具有慢性伯氏疏螺旋体感染；

iv）根据测定存在针对OspA和OspC的抗体且不存在针对OspF的抗体，鉴定所述哺乳动物已接种并具有早期伯氏疏螺旋体感染；

v）根据测定存在针对OspA和OspF的抗体且不存在针对OspC的抗体，鉴定所述哺乳动物已接种并具有慢性伯氏疏螺旋体感染；

vi）根据测定存在针对OspC和OspF的抗体且不存在针对OspA的抗体，鉴定所述哺乳动物具有中期伯氏疏螺旋体感染；或者

vii）根据测定存在针对OspC、OspF和OspA的抗体，鉴定所述哺乳动物已接种并且具有中期伯氏疏螺旋体感染。

还包括组合物和试剂盒，其包含新型分离的蛋白及编码其的分离的核酸，所述新型分离的蛋白包括伯氏疏螺旋体蛋白。

附图简要说明