[发明专利]长效干扰素α缀合物的液体制剂

说明书

技术领域

本发明涉及长效干扰素α缀合物的液体制剂，其包含药用有效量的干扰素α缀合物和不含白蛋白的稳定剂，所述稳定剂包含缓冲剂、糖醇、非离子型表面活性剂和等张剂。

背景技术

在1957年，Isaacs和Lindenmann注意到当小鸡感染甲型流感病毒时干扰所述病毒的因子，发现了干扰素(Isaacs，K.和Lindenmann，J.，Proc.R.Soc.Lond.，B147，258-267(1957))。人干扰素是被称为细胞因子的蛋白质，其允许细胞之间的通讯从而可引发消灭病原体(如病毒)之免疫系统的保护性防御。根据释放所述干扰素的细胞类型，干扰素可被分类为干扰素α、干扰素β和干扰素γ(Kirchner， H.等，Tex.Rep.Biol.Med.，41，89-93(1981)：Stanton，G.J.等，Tex.Rep.Biol.Med.，41，84-88(1981))。即，干扰素α由B淋巴细胞释放，干扰素β由裸淋巴细胞(null lymphocyte)和巨噬细胞释放，而干扰素γ由T淋巴细胞在巨噬细胞帮助下释放。

报道称干扰素表现出抗病毒活性、抗癌活性、激活NK(自然杀伤)细胞和对髓细胞生长的协同抑制作用(Klimpel等，J.Immunol.，129，76-78(1982)；Fleischmann，W.R.等，J.Natl.Cancer Inst.，65，863-966(1980)；Weigent.等，Infec.Immun.，40，35-38(1980))。从那时起，大量研究发现除表现出抗病毒作用之外，干扰素还在细胞内基因的表达、结构和功能中充当调节因子，尤其是直接的抗增殖作用。此外，干扰素的一个功能是对抗由感染和多种肿瘤引起的多种疾病。

在暴露于分裂素、病毒或肿瘤细胞之后白细胞中产生干扰素α。迄今为止，已发现干扰素α的至少20种基因的多基因家族并且已知其编码大多数由165或166个氨基酸组成的多肽。

临床测试已证明重组人干扰素α在治疗多种实体瘤方面有效。特别地，已知干扰素α对膀胱癌、肾癌和AIDS相关卡波西式肉瘤(AIDS-associated kaposi’s sarcoma)具有有效的治疗作用(Torti，F.M.，J.Clin.Oncol.，6，476-483(1988)；Vugrin，D.等，Cancer Treat.Rep.，69，817-820(1985)；Rios，A.等，J.Clin.Oncol.，3，506-512(1985))。此外，最近的报道提到，干扰素α在治疗上适用于治疗丙型肝炎(Davis，G.G.等，N.Engl.J.Med.，321，1501-1506(1989))。基于这些新发现，干扰素α的治疗领域变得更广。

多肽(例如干扰素α)因其低稳定性而倾向于容易变性、被血液中的蛋白水解酶降解并且易于通过肾或肝。因此，需要频繁地向患者施用蛋白质药物(包含作为药物有效组分的多肽)以维持期望的血液水平浓度和效价。但是，蛋这种白质药物的频繁施用(大多数为注射形式)造成患者疼痛。

为了解决这些问题，进行了许多努力来改善蛋白质药物的血清稳定性并使血液中的药物在较长的时间内维持在高水平，从而使药物的药效最大化。为了在长效制剂中使用，必须将蛋白质药物配制成高稳定性的并且其效价维持在足够高的水平而不引起患者免疫应答。

稳定蛋白质并预防酶促降解和通过肾脏清除的常规方法是用具有高溶解度的聚合物(例如聚乙二醇(PEG))来对蛋白质药物表面进行化学修饰。通过与靶蛋白的特定区域或多个区域结合，PEG使蛋白质稳定并防止水解，而不引起严重的副作用(Sada等，J.Fermentation Bioengineering71：137-139)。但是，尽管聚乙二醇化能够提高蛋白质稳定性，但其也存在问题，例如大大降低生理活性蛋白质的效价。此外，产量随着PEG的分子量的增加而降低，这是由于蛋白质的反应性降低。

用于改善生理活性蛋白质体内稳定性的另一种替代性策略是借助遗传重组技术将生理活性蛋白质的基因与编码具有高血清稳定性之蛋白质的基因连接起来，并且培养经重组基因转染的细胞以产生融合蛋白。例如，融合蛋白可这样制备：通过遗传重组将白蛋白(已知的在增强蛋白质稳定性方面最有效的蛋白质)或其片段与目的生理活性蛋白质缀合(PCT公开No.WO93/15199和WO93/15200、欧洲专利公开No.413,622)。