[发明专利]用于在哺乳动物中预防和治疗金迪普拉病毒感染的疫苗制剂

权利要求书

1.一种用于在哺乳动物中预防和治疗金迪普拉病毒感染的疫苗制剂，所述疫苗制剂包含任何基因型的金迪普拉病毒或其病毒抗原作为治疗活性成分。

2.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述金迪普拉病毒是由热、紫外线、通过化学方法或通过伽玛辐照灭活的。

3.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中金迪普拉病毒的所述化学灭活由选自如下的条件进行：

a.使用β丙内酯(BPL)：病毒悬液为1∶1500至1∶4000、优选地在1∶2000至1∶3500之间的稀释度的浓度的BPL，在2-8℃下2-14天的时间段、优选地在2-8℃下7天、或者在22℃下4-6天的时间段；

b.使用福尔马林(甲醛)比病毒悬液为1∶2500至1∶4000稀释度的浓度的福尔马林，在2-8℃下4-15天的时间段或在25℃的温度下4-8天的时间段。

4.根据权利要求2所述的疫苗制剂，其中在Vero细胞中培养的所述金迪普拉病毒是灭活的，其中所述灭活在所述病毒的纯化之前或之后进行。

5.根据权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述金迪普拉病毒抗原是纯化的金迪普拉病毒的糖蛋白。

6.如权利要求5所述的疫苗制剂，其中所述糖蛋白是从真核表达系统表达和纯化的重组蛋白，所述真核表达系统例如杆状病毒介导的昆虫细胞表达系统、酵母或者哺乳动物细胞。

7.用于根据权利要求6中所述的重组表达的宿主细胞是酵母，例如酵母菌属(Saccharomyces spp)、克鲁维酵母菌属(Kluveromyces spp)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、多形汉逊酵母(Hanensula polymorpha)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)等，优选巴斯德毕赤酵母。

8.一种重组DNA构建体，包含(i)载体和(ii)编码根据前述权利要求任一项所述的氨基酸序列为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8的糖蛋白的SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.9中的至少一种核酸片段。

9.根据权利要求1所述的免疫原性制品，其中所述金迪普拉病毒抗原是从原核宿主例如大肠杆菌(E.coli)表达和纯化的SEQ ID NO.7的重组核蛋白。

10.一种用于产生前述权利要求中任一项所述的重组蛋白的方法，包括下列步骤：

i)培养用权利要求8和9所述的重组构建体克隆的宿主细胞；

ii)收集细胞并且从中分离所述重组蛋白；

iii)通过以下方法中的至少一种纯化所述蛋白：离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、疏水柱层析、用盐、有机溶剂分级、离心等。

11.一种浓缩和纯化病毒的方法，包括下列方法的一种或多种：

a.通过100kD-1000kD膜超滤；

b.超速离心和密度梯度离心；

c.柱层析，例如凝胶过滤、离子交换层析、疏水相互作用层析、亲和基质层析、用聚乙二醇、Himax^TM、有机盐和无机盐沉淀。

12.如权利要求1所述的稳定的疫苗制剂，包含：

a.纯化和灭活的金迪普拉病毒抗原；

b.磷酸盐缓冲液10mM至500mM pH6.7至7.4、或者相似pH的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液；

c.浓度在0.1％至5％范围内的糖和糖醇，其中所述糖选自包括以下的列表：乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、和糖醇例如甘露醇或山梨醇、菊粉和/或其中不同糖的组合；

d.25mM-200mM NaCl；

e.选自以下组成的列表的佐剂：氢氧化铝、磷酸铝、伽玛菊粉、阿伽目林或其组合；

f.任选地包括浓度在0.1％至5％的蛋白添加剂，例如人类血清白蛋白。