[发明专利]嵌合蜘蛛丝及其用途

权利要求书

1.一种重组蜘蛛丝蛋白质，该蛋白质由一种嵌合序列进行编码，该嵌合序列包括一个蚕序列、一个或多个蜘蛛丝弹性基序序列、一个或多个蜘蛛丝强度基序序列、或它们的一种组合。

2.如权利要求1所述的重组丝蛋白质，其中该蜘蛛丝弹性基序序列是一种MaSp样的基序序列或一种MiSp样的基序序列。

3.如权利要求2所述的重组蜘蛛丝蛋白质，其中该MaSp样的基序是MaSp1、MaSp2、或它们的一种组合。

4.如权利要求1所述的重组蜘蛛丝蛋白质，进一步包括一种生长促进肽。

5.包括如权利要求1所述的重组丝蛋白质的一种嵌合蜘蛛丝/蚕纤维，其中所述丝纤维具有大于天然蚕丝纤维的一个拉伸强度。

6.一种转基因蚕，该转基因蚕具有一个重组嵌合基因，该重组嵌合基因具有一种序列，该序列包括一个或多个蜘蛛丝弹性基序序列、一个或多个蜘蛛丝强度基序序列、或它们的一种组合。

7.如权利要求6所述的转基因蚕，其中该蚕能够生产一种嵌合的蚕/蜘蛛丝蛋白质，该嵌合的蚕/蜘蛛丝蛋白质适用于具有大于天然蚕纤维两倍的一个拉伸强度的一种嵌合蜘蛛丝/蚕纤维的生产。

8.如权利要求5所述的转基因蚕，其中该转基因蚕是一种转基因家蚕。

9.如权利要求6所述的转基因蚕，包括8个蜘蛛丝弹性基序序列。

10.如权利要求8所述的转基因蚕，其中该蜘蛛丝弹性基序序列是一种MaSp样的基序序列或一种MiSp样的基序序列。

11.一种基因构建体，包括能够表达一种丝心蛋白重链（fhc）-蜘蛛丝嵌合体的一种家蚕丝心蛋白重链表达盒，所述构建体包括对一种蜘蛛丝弹性基序序列、一种蜘蛛丝强度基序序列、或两者进行编码的一种蜘蛛丝蛋白质序列，所述构建体在侧翼分布有一种家蚕fhc丝蛋白质序列的N-和C-末端片段。

12.如权利要求11所述的基因构建体，其中该蜘蛛丝蛋白质序列包括一种推定的鞭状丝弹性基序序列的4至8个拷贝以及一种推定的牵丝强度基序序列的1至4个拷贝。

13.如权利要求11所述的基因构建体，其中该弹性基序序列是GPGGA并且该强度基序序列是GGPSGPGS(A)8。

14.一种如在图5中所限定的基因构建体。

15.一种如在图12A中所限定的piggyBac载体。

16.如在图12B中所限定的piggyBac载体。

17.一种用于嵌合蜘蛛丝复合纤维的生产的制造方法，该方法包括：

a.)使用一种piggyBac载体系统来制备一种转基因蚕，该载体系统具有对一种嵌合蜘蛛丝强度基序序列、一种蜘蛛丝柔性基序序列或它们的一种组合进行编码的一种基因；

b.)允许该转基因蚕在对于该蚕是天然的适合生理条件下生产一种茧；

c.)收集这些茧，并且提取嵌合蜘蛛丝纤维。

18.如权利要求17所述的方法，其中该转基因蚕是一种转基因家蚕。

19.制备一种转基因家蚕的方法，该转基因家蚕能够稳定地表达一种适用于装配为一种蜘蛛丝复合纤维的、稳定的嵌合蜘蛛丝蛋白质，所述嵌合蜘蛛丝蛋白质由包括一种蜘蛛丝柔性基序序列以及一种蜘蛛丝强度基序序列、或它们的一种组合的一种序列进行编码，所述方法包括：

a.)将一种piggyBac载体插入一种突变的家蚕卵中以提供注入的家蚕卵，该载体包括一种重组基因盒，该重组基因盒具有一个蜘蛛丝柔性基序序列、一个蜘蛛丝强度基序序列、或它们的一种组合；

b.)允许这些卵在适合的孵育条件下孵出，从而提供幼虫；

c.)允许该幼虫在适合的孵育条件下成熟；并且

d(c).)选择转基因家蚕。

20.如权利要求19所述的方法，其中重组的基因盒包括一个绿色荧光蛋白（GFP），用于转基因家蚕的选择。

21.如权利要求19所述的方法，其中该piggyBac载体是pXLBacII-ECFP NTD CTD masp1X16（10,458bp）或pXLBacII-ECFP NTD CTD maspX24（11,250bp）。