[发明专利]组合的组织学染色

权利要求书

1.一种使组织样品中的靶标可视化的方法，以任意顺序包括：

（a）使用第一染色对所述样品进行染色，

（b）使用第二染色对所述样品进行染色，

（c）使用第三染色对所述样品进行染色，

其中

（i）经由可检测酶底物在所述样品的包括所述靶标单元的部位处的酶介导沉积，产生所述第一染色和所述第二染色；

（ii）所述第一染色使靶标单元的第一部分子群可视化，且所述第二染色使靶标单元的第二部分子群可视化；

（iii）所述第一染色和所述第二染色具有不同的染色形式，其中所述第一染色的染色形式由所述样品的包括靶标单元的部位处的染色的明显点构成；

并且

（iv）所述第三染色是使所述组织样品的形态学特征可视化而不使所述靶标可视化的组织学染色。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标的第一部分子群是所述样品中靶标总量的小部分，且所述靶标的第二部分子群是所述样品中靶标总量的大部分。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一染色的光学特征不同于所述第二染色。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中染色（a）和（b）采用靶标特异结合剂来使所述靶标与酶活性相关联。

5.根据权利要求4所述的方法，其中染色（a）的至少一种靶标特异结合剂和结合（b）的至少一种靶标特异结合剂是与所述靶标的特异结合对的成员。

6.根据权利要求5所述的方法，其中染色（a）和染色（b）的所述至少一种特异结合剂是相同的结合分子。

7.根据权利要求5所述的方法，其中染色（a）和染色（b）的所述至少一种特异结合剂是不同的结合分子。

8.根据权利要求4～7中任一项所述的方法，其中染色（a）和染色（b）的所述至少一种特异结合剂是抗体、核酸或核酸类似物，或者包括抗体、核酸或核酸类似物。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中通过由相同的酶介导的可检测酶底物的沉积，产生所述第一染色和所述第二染色。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述酶是辣根过氧化物酶。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中通过由不同的酶介导的可检测酶底物的沉积，产生所述第一染色和所述第二染色。

12.根据权利要求11所述的方法，其中产生所述第一染色的酶是辣根过氧化物酶，且产生所述第二染色的酶是碱性磷酸酶。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中所述第一染色的明显点具有约0.4微米至约4微米的视直径。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的方法，其中所述第三染色是组织学染色。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第三染色是苏木精。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述第三染色是组合的组织学染色，例如苏木精和伊红染色。

17.根据权利要求14所述的方法，其中所述第三染色是特殊的组织学染色。

18.根据权利要求1～17中任一项所述的方法，其中所述靶标是生物标记物。

19.根据权利要求19所述的方法，其中所述靶标是蛋白或核酸。