[发明专利]含有APE1/REF-1的膀胱癌诊断用组合物及利用其的膀胱癌诊断仪

说明书

技术领域

本发明涉及含有APE1/Ref-1的膀胱癌诊断用组合物及利用其的膀胱癌诊断仪。

背景技术

膀胱癌是在泌尿系统癌症中最常见的癌症，其产生原因也较多地被查明。主要被认为吸烟或者各种化学物质（例如，皮革等染色涂料、大气污染物、人造甜味剂、硝酸盐）被吸入到体内后，通过小便排泄出来的同时刺激膀胱壁，从而诱发癌症。

在传统的膀胱癌检查中使用从小便中找出非正常细胞的方法，但是其精确度低。此外，将导液管（导管）插入到膀胱后，摘除并检查疑似癌变组织的膀胱镜检查是侵入式方法，从而具有较高的精确度。

通常，如果在早期诊断出膀胱癌，则患者的生存率高，但是实际上不易在早期诊断出膀胱癌。现有使用的膀胱癌诊断方法是使用切开身体的一部分的方法，但是其很难在早期诊断出膀胱癌。膀胱癌根据是否侵袭到膀胱肌层来区分为浅表性或者浸润性癌症，在诊断时平均大约30%的患者属于浸润性膀胱癌。由此，如果要延长患者的生存期，则最好在病变范围小时进行早期诊断。由此，迫切需要开发与现有的各种膀胱癌诊断方法相比更有效率的诊断方法，换句话说，膀胱癌特异性生物标记物，其可进行早期诊断，并且可大量处理临床标本，并且灵敏度及特异性高。

另外，APE1/Ref-1（apurinic/apyrimidinic endonuclease/redox factor-1）是由包括氧化还原区（redox region）、DNA修复区（DNA repair region）的318个氨基酸构成的多功能蛋白质。上述蛋白质被认为具有如下功能：在DNA损伤时复原损伤部位的APE1的功能，以及如AP-1、NF-kB一样的转录因子的还原性调节功能（redox function）（Gurusamy,Malik et al.2007）。APE1/Ref-1的转录因子还原性调节功能在许多转录因子的DNA结合区中将作为氧化型半胱氨酸（cysteine）的残余物进行还原，从而执行易于转录的作用（Xanthoudakis,Miao et al.1994;Tell,Damante et al.2005）。

APE1/Ref-1存在于所有的细胞及组织，并且细胞内表达位置被认为根据细胞而有所不同。在转录阶段及转录后阶段的水平时对APE1/Ref-1的表达调节进行调节。增加APE1/Ref-1的表达的主要原因是活性氧簇（reactive oxygen species；ROS）。在巨噬细胞及淋巴球对过氧化氢及次氯酸（hypochlorous acid；HOCI）进行处理时，细胞内APE1/Ref-1的表达会增加，上述APE1/Ref-1的表达增加被认为用于保护细胞的毒性及氧化性损伤的细胞的适应反应（Ramana Boldogh et al.1998）。

对于APE1/Ref-1的细胞内位置的报告有各种各样。如果对APE1/Ref-1的蛋白质序列进行分析，则可想到上述各种细胞内位置的多样性。在APE1/Ref-1的氨基酸末端部位（endsite）存在有核定位信号（nuclear localization signal;NLS）（Jackson,Theriot et al.2005），并且被认为在作为半胱氨酸的93号和310号氨基酸的氮化合中存在有核输出信号（nuclear export signal;NES），上述核输出信号将存在于核内的APE1/Ref-1移动至细胞质（Qu,Liu et al.2007）。另外，在线粒体中也被确认有APE1/Ref-1蛋白质的表达（Chattopadhyay,Wiederhold et al.2006）。

生成于细胞内的APE1/Ref-1蛋白质可游离至细胞外。在巨噬细胞中，根据内毒素的细胞活性及炎症反应将APE1/Ref-1游离至细胞外。由此，正确测定APE1/Ref-1的能力被认为在心脑血管疾病、传染疾病及肿瘤等许多生物学过程中对APE1/Ref-1的潜在性作用等进行理解时很重要。

但是，到目前为止还没有对于APE1/Ref-1蛋白质是否作为膀胱癌诊断用标记物进行作用的报告，与此相关的研究也处于全无的状态。由此，迫切需要生物标记物的开发,其在健康检查时，从血液中简便地早期诊断出膀胱癌，从而可增加患者的生存率。

发明内容