[发明专利]检测生理活性物质的生物测定法

权利要求书

1.表达Gs-偶联GPCR、cAMP依赖性钙通道和钙敏感蛋白的细胞。

2.根据权利要求1的细胞，其中所述Gs-偶联GPCR是GLP-1受体或V2R。

3.根据权利要求1或2的细胞，其中所述cAMP依赖性钙通道是CNG钙通道。

4.根据权利要求1至3中任一项的细胞，其中所述钙敏感蛋白是脱辅基水母发光蛋白。

5.根据权利要求1至4中任一项的细胞，其中所述V2R具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列，所述cAMP依赖性钙通道是具有SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的经修饰的CNG钙通道，且所述钙敏感蛋白是具有SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的经修饰的脱辅基水母发光蛋白。

6.根据权利要求1至4中任一项的细胞，其中所述GLP-1受体具有SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列，所述cAMP依赖性钙通道是具有SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的经修饰的CNG钙通道，且所述钙敏感蛋白是具有SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的经修饰的脱辅基水母发光蛋白。

7.用于测定生物样品中活性型GLP-1的量或AVP的量的试剂盒，其包含根据权利要求1至6中任一项的细胞。

8.根据权利要求7的试剂盒，其中所述试剂盒用于诊断尿崩症或SIADH，用于确定应选择高渗补液还是低渗补液，或用于确定GLP-1相关治疗药物的效果。

9.根据权利要求7或8的试剂盒，其中所述细胞是冷冻细胞。

10.根据权利要求7至9中任一项的试剂盒，其进一步包含钙敏感蛋白的发光底物。

11.根据权利要求10的试剂盒，其中所述钙敏感蛋白的发光底物是腔肠素或腔肠素衍生物。

12.诊断尿崩症或SIADH的方法，确定应选择高渗补液还是低渗补液的方法，或确定GLP-1相关治疗药物的效果的方法，包括以下步骤（1）至（3）：

（1）制备混合物，其含有权利要求1至6中任一项的细胞、钙敏感蛋白的发光底物、不含Ca²⁺的培养基，以及来源于受试对象血液的样品；

（2）向（1）中制备的混合物中添加含Ca²⁺溶液；及

（3）测定细胞发出的钙敏感蛋白的发光。

13.筛选Gs-偶联GPCR拮抗剂的方法，包括以下步骤（A'）至（C'）：

（A'）制备混合物，其含有权利要求1至6中任一项的细胞、钙敏感蛋白的发光底物、不含Ca²⁺的培养基、权利要求1至6中任一项的细胞内表达的GPCR的激动剂，以及受试化合物；

（B'）向（A'）中制备的混合物中添加含Ca²⁺溶液；及

（C'） 测定细胞发出的钙敏感蛋白的发光。

14.筛选Gs-偶联GPCR拮抗剂的方法，包括以下步骤（A''）至（C''）：

（A''） 制备混合物，其含有权利要求1至6中任一项的细胞、钙敏感蛋白的发光底物、含Ca²⁺的培养基、权利要求1至6中任一项的细胞内表达的GPCR的激动剂，以及受试化合物；

（B''） 向（A''）中制备的混合物中添加弗司可林；及

（C''） 测定细胞发出的钙敏感蛋白的发光。

15.根据权利要求13或14的方法，其中所述Gs-偶联GPCR是GLP-1受体或V2R。