[发明专利]高免疫原性HIV P24序列

说明书

技术领域

本发明涉及免疫原性组合物和用于免疫原设计的方法，其基于使用衍生自抗原蛋白(更特别地，抗原性祖先p24)序列内保守元件的肽。

背景技术

HIV-1疫苗设计必须要应付广泛的HIV-1序列多样性。聚焦于HIV-1基因组高度保守的区域来设计疫苗免疫原可大大有助于克服该问题。另外，针对基因组高度保守区段建立免疫应答还可防止逃脱CTL的变体(CTL escape variant)的快速出现，因为这种突变将可能引起病毒复制适合度的显著降低。另外，使疫苗诱导应答针对最保守的靶标避免了诱导用作免疫优势假目标(decoy)的高度可变表位的应答，所述应答活跃地使得应答远离保护性的不变的表位。

采用B亚型(clade B)和C亚型(clade C)感染个体的多个不同组的研究显示出针对HIV-1Gag的细胞毒性T细胞应答与体内HIV-1的相关控制相关联。参见Kiepiela P，等，Nat.Med.2007；13：46-53；Masemola A，等，J.Virol.2004；78：3233-3243；Mothe B，等，Dis.Markers2009；27：105-120；和R，等，J.Virol.2006；80：3122-3125。已经提出了数个假说来解释这些观察结果。已经提出，衍生自感染病毒颗粒中所含Gag蛋白质的表位的快速表现可使得Gag特异性CTL应答比其他应答更有效。参见Sacha J，等，J.Immunol.2007；178：2746-2754。或者，gag序列的高水平保守性也可反映对于维持的Gag蛋白质之结构完整性的需要及其对逃脱突变的低耐受性。参见Schneidewind A，等，J.Virol.2008；82：5594-5605。还讨论了，HIV-1Gag可包含与相对HIV-1控制有关的HLA等位基因(例如HLA-B27、B57等)所限制的大量CTL表位，尽管来自基于大群体研究的数据表明这不大可能。参见Borghans J，等，PLoS ONE2007；2：e920和Kiepiela，2007，如前。呈递给这些有益HLA等位基因的Gag中表位的特异性积累得不到明确定义的CTL表位中所述高水平HLA混杂性的支持，其允许这些“好”表位在其他HLA等位基因背景中呈递。另外，在报道Gag特异性应答之有益作用的所有研究中，一些HIV-1感染非控制者也建立了可检出的针对Gag的应答，这产生了以下的问题：为什么这些个体不能够控制病毒复制。甚至是下述对象中对于保护性HLA-B57等位基因所限制的Gag特异性应答也报道了这种情况，所述对象感染具有含优势并推测为保护性表位之完整野生型序列的HIV-1毒株但是其却步控制HIV复制。参见Migueles S.，等，J.Virol.2003；77：6889-6898。这些研究连同之前发布的关于次优势CTL应答在HIV-1以及在SIV感染中之影响的数据表明，功能特性(包括功能性亲合力和变体交叉反应性)可以是用于增加有益的保护性CTL应答的决定性参数。参见Frahm N.，等，Nat.Immunol.2006；7：173-178和Friedrich T，等，J.Virol.2007；81：3465-3476。

另外，我们有关针对病毒蛋白质组之任意部分的宿主免疫应答的理解可能由于技术的局限性而是不完整的，使用抗原测试试剂也可能引起特定的偏好。尽管使用可变长度(长度为15-20个氨基酸)之重叠肽(OLP)组的早期研究没有产生显著不同的应答率，但是我们自己在使用18聚体OLP或最佳确定的CTL表位的HIV-1感染的个体中的观察结果表明，短10聚体肽比更长OLP事实上提供多得多的总应答观察结果。参见Draenert R，等，J.Immunol.Methods2003；275：19-29和Frahm，2007，如前。与通常用于离体分析中的相应18聚体OLP组相比，较短肽可能要求较少的在HLA I类分子有效呈递之前的抗原加工，从而可鉴定更多应答和更低功能性亲合力的应答。

附图说明

图1.COT-M Gag-p24序列和CE区段的位置。在之前描述的COT-M Gag p24的蛋白质序列的上方示出已知最佳定义的CTL表位的位置和HLA限制元件。参见Rolland M，等，PLOS Pathogen.2007；3：e157。灰色框表示位于p24内的具有在下方包括的可替换残基的7个CE区段。