[发明专利]包含4-羟基苯甲酰基-COA硫酯酶的遗传改造的微生物以及使用其的方法

权利要求书

1.一种微生物，其包含编码4-羟基苯甲酰基-辅酶A(CoA)硫酯酶的重组核酸分子，所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2组成的群组，其中所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶水解酰基-酰基载体蛋白(酰基-ACP)，以及其中所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶在所述微生物中的表达使得产生至少一种游离脂肪酸、至少一种脂肪酸衍生物，至少一种烷烃和/或至少一种烯烃，以及其中至少30重量％的由所述微生物产生的所述游离脂肪酸是酰基链长度为8个碳、10个碳、12个碳、14个碳、16个碳、18个碳的游离脂肪酸或其任一混合物，以及其中所述至少一种脂肪酸衍生物包含至少一种脂肪醛、至少一种脂肪醇、至少一种蜡酯或其组合。

2.根据权利要求1所述的微生物，其中每种脂肪酸衍生物的总碳数为7到36。

3.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物能产生至少一种酰基链长度为8到24个碳的脂肪酸。

4.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物能产生至少一种酰基链长度为8到18个碳的脂肪酸。

5.根据权利要求1所述的微生物，其中编码所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶的所述核酸分子被稳定整合到所述微生物的染色体中。

6.根据权利要求1所述的微生物，其中编码所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶的所述核酸分子位于表达构筑体中。

7.根据权利要求6所述的微生物，其中所述表达构筑体包含可操作地连接到编码所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶的所述核酸分子的启动子，且其中所述启动子在所述微生物中发挥功能。

8.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物进一步包含至少一种编码至少一种额外多肽的额外核酸分子，其中所述额外核酸分子在所述微生物中的表达促进产生游离脂肪酸和/或脂肪酸衍生物。

9.根据权利要求8所述的微生物，其中所述至少一种额外核酸分子编码乙酰-CoA羧化酶或β-酮酰基合酶KAS。

10.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物具有减弱的至少一种编码包含酰基-酰基载体蛋白ACP合酶、酰基-CoA脱氢酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、乙醛-CoA脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、乙酸激酶和其组合的蛋白质的基因的表达。

11.根据权利要求1所述的微生物，其中所述微生物是光合微生物。

12.根据权利要求11所述的微生物，其中所述光合微生物是真核微藻或蓝细菌。

13.一种用于在培养物中产生游离脂肪酸或脂肪酸衍生物的方法，所述方法包含在生长培养基中培养微生物，

其中所述微生物包含至少一种编码4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶的重组核酸分子，所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶选自由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2组成的群组；

其中所述微生物是在容许在培养阶段期间在所述微生物中表达所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶的条件下生长；

其中所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶在所述微生物中的表达使得产生至少一种游离脂肪酸、至少一种脂肪酸衍生物、至少一种烷烃和/或至少一种烯烃；且

其中所述4-羟基苯甲酰基-CoA硫酯酶水解酰基-ACP；其中所述至少一种脂肪酸衍生物包含至少一种脂肪醛、至少一种脂肪醇、至少一种蜡酯或其组合；以及其中至少30重量％的由所述微生物产生的所述游离脂肪酸是酰基链长度为8个碳、10个碳、12个碳、14个碳、16个碳、18个碳的游离脂肪酸或其任一混合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中由所述微生物产生的每种脂肪酸衍生物的总碳数为7到36。