[发明专利]生物学活性的经放射性标记的Cry1Fa和受体结合测定方法

权利要求书

1.选自下组的蛋白质：Cry1Fa全毒素和Cry1Fa核心毒素，其中所述蛋白质用放射性碘同位素标记，且其中所述标记的蛋白质保留选择性结合从甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)的中肠制备的刷状缘膜囊中的受体的能力。

2.权利要求1的蛋白质，其是Cry1Fa全毒素。

3.权利要求1的蛋白质，其是Cry1Fa核心毒素。

4.一种用于测定Cry1Fa核心毒素对给定昆虫物种的中肠上的受体的结合活性的饱和型结合测定方法，该方法包括：

a)制备含有自所述昆虫物种的中肠分离的已知浓度的刷状缘膜囊的悬浮液；

b)在分开的容器中将增加量的经标记的权利要求3的Cry1Fa在如下的时间和缓冲液条件下添加至固定量的所述刷状缘膜囊悬浮液，所述时间和缓冲液条件容许所述经标记的Cry1Fa结合所述刷状缘膜囊上的受体；

c)分开未结合的经标记的Cry1Fa与同所述刷状缘膜囊上的所述受体结合的经标记的Cry1Fa；并

d)计算从与所述刷状缘膜囊结合的所述经标记的Cry1Fa发射的任何放射性信号。

5.一种用于测定交叉反应性的竞争性结合测定方法，该方法包括：

a)制备含有自昆虫物种的中肠分离的刷状缘膜囊的悬浮液；

b)在如下的时间和缓冲液条件下混合经标记的权利要求3的Cry1Fa与过量的未标记的不同蛋白质和所述刷状缘膜悬浮液，所述时间和缓冲液条件容许所述经标记的Cry1Fa和未标记的蛋白质结合所述刷状缘膜囊上的受体；

c)从未结合的经标记的Cry1Fa和未结合的未标记的蛋白质混合物分离结合的刷状缘膜囊；并

d)将从所述结合的刷状缘膜囊级分发射的放射性与从所述未结合的混合物级分发射的放射性比较。

6.权利要求5的方法，其中所述未标记的蛋白质是Cry蛋白。