[发明专利]活性药物成分及其中间物的酶促合成

权利要求书

1.用于制备式(I)的化合物

或其可药用的盐或立体异构体的方法，

其中

R₁独立于R₂表示H、X、(CH₂)_n-CH₃、O-(CH₂)_n-CH₃、S-(CH₂)_n-CH₃、OCO(CH₂)_nCH₃；和

R₂独立于R₁地表示H或(CH₂)_m-CH₃；

或R₁和R₂都表示X或O((CH₂)_nCH₃)；

其中

上述任一个CH₂或CH₃基团可任选地被X、(CH₂)_n-CH₃、C_6-10芳基或O-(CH₂)_n-CH₃另外取代；

X表示F、Cl、Br或I；

n代表0至10的整数；

m代表0至3的整数；

所述方法包括使式(II)的非天然内半缩醛化合物，

其中R₁和R₂的定义如上，与醛糖1-脱氢酶接触，

其中所述醛糖1-脱氢酶是Ylil醛糖脱氢酶或mGDH的葡萄糖脱氢酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述芳基是苯基。

3.根据权利要求1的方法，其中醛糖1-脱氢酶选自由脱氢酶编码基因编码的脱氢酶，所述脱氢酶编码基因由SEQ ID NO.01、03、05、07、09、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59和61的任一条核苷酸序列构成；或者由以下任一条氨基酸序列定义的脱氢酶：SEQ ID NO.02、04、06、08、10、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60和62。

4.根据权利要求1的方法，其中2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶(DERA,EC4.1.2.4)用于制备式(II)的化合物。

5.根据权利要求1的方法，其中醛糖1-脱氢酶，任选地以及DERA酶，独立地包含在活的全细胞、失活的全细胞、均质化的全细胞或无细胞提取物中；或者是纯化的、固定的和/或处于胞外表达的蛋白质的形式。

6.根据权利要求4的方法，其中两种所述的酶，即，DERA和醛糖1-脱氢酶，都由一个或多个细胞表达，其中细胞类型选自细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。

7.根据权利要求4的方法，还存在吡咯并喹啉醌(PQQ)。

8.根据权利要求7的方法，其中通过选自以下的手段实现吡咯并喹啉醌(PQQ)的存在：

(I)从外部添加PQQ；

(II)使用不仅存在脱氢酶活性，还具有内在的PQQ生物合成能力的宿主生物；和

(III)使用不具有内在的PQQ生物合成能力，但经过遗传改造表达PQQ合成相关基因簇的微生物。

9.根据权利要求8的方法，其中，根据手段(III)使用的微生物经过遗传改造，从而表达PQQ合成编码基因，所述编码基因包含在SEQ ID NO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一条核苷酸序列内或由SEQ ID NO.11、17、63、64、65、66、67、68、69、70的任一条核苷酸序列组成；或者表达编码SEQ ID NO.12、13、14、15、16、18、19、20、21和22的任一条氨基酸序列的PQQ-合成基因。

10.根据权利要求1的方法，还包括将所述化合物(I)置于足以制备抑制素或其可药用的盐的条件下，任选地使抑制素产物成盐、酯化或立体异构选择性地拆分。