[发明专利]表达和纯化植物中重组蛋白的低成本方法

权利要求书

1.一种从植物、植物部分或植物细胞获得所需蛋白质的方法，所述方法包括

(a)从产生所需蛋白质的所述植物、植物部分或植物细胞制备蛋白质提取物，其中，所需蛋白质为融合蛋白形式，所述融合蛋白在所需蛋白质的N末端或C末端或所述两个末端包含ELP-内含肽标签，该标签包含弹性蛋白样多肽(ELP)结构域和内含肽剪接元件(内含肽)，其中，所述内含肽在所需蛋白质的N和/或C末端或所述两个末端与所述ELP结构域之间；

(b)可任选地从所述提取物去除不溶性物质；

(c)使所述融合蛋白聚集并与所述提取物的剩余部分分离；

(d)使所述融合蛋白重溶解于水性溶液；

可任选地重复步骤(c)和(d)；

(e)实行所述融合蛋白的切割；以及

(f)分离所需蛋白质和所述一个/多个标签。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ELP结构域包含至少一个ELP单元。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白在所需蛋白质与内含肽和/或内含肽与ELP和/或多个ELP单元之间还包含一个或多个接头序列。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组蛋白是凝集素或细胞因子。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)包括对温度、pH、溶剂内含物和/或所用装置进行一种或多种调节。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中的分离包括离心或微过滤。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(d)包括改变含所述聚集物的水性混合物的温度、pH、盐和/或其它成分。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(e)包括调整所述水性溶液的pH、温度和成分。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(f)包括聚集和分离所述ELP-内含肽标签。

10.一种可在植物细胞内操作以在所述植物细胞中表达融合蛋白的核酸，所述融合蛋白在所需蛋白质的N末端或C末端或所述两个末端包含ELP-内含肽标签，该标签包含弹性蛋白样多肽(ELP)结构域和内含肽剪接元件(内含肽)，其中，所述内含肽在所需蛋白质的N和/或C末端或所述两个末端与所述ELP结构域之间。

11.包含权利要求10所述的核酸的植物、植物细胞或植物部分。

12.一种生产在所需蛋白质的N和/或C末端具有ELP-内含肽标签的融合蛋白的方法，所述方法包括培养权利要求11所述的植物、植物细胞或植物部分。

13.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，所述ELP结构域包含至少一个ELP单元。

14.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，所述融合在所需蛋白质与内含肽和/或内含肽与ELP和/或多个ELP单元之间还包括一个或多个接头序列。

15.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，所述重组蛋白是凝集素或细胞因子。

16.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，所述内含肽在所需蛋白质的N末端与一个/多个所述ELP结构域之间。

17.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，所述内含肽在所需蛋白质的C末端与一个/多个所述ELP结构域之间。

18.包含融合蛋白的植物、植物细胞或植物部分，所述融合蛋白在所需蛋白质的N末端或C末端或所述两个末端含有ELP-内含肽标签，该标签包含弹性蛋白样多肽(ELP)结构域和内含肽剪接元件(内含肽)，其中，所述内含肽在所需蛋白质的N和/或C末端或所述两个末端与所述ELP结构域之间。