[发明专利]抗体的快速人源化

权利要求书

1.一种生产人源化抗体[[与模板抗体相比，其表现出相等或更高的对抗原的亲和性]]的方法，所述方法包括：

(a)合成包含互补性决定区(CDR)片段编码文库和框架(FW)片段编码文库的免疫球蛋白重链(HC)双链DNA片段文库，其中至少一个CDR片段文库源自所述模板抗体，并且每个FW片段文库[[源]]自从功能表达的人抗体获得的人框架集合[[限于序列]]；

(b)合成包含CDR片段编码文库和FW片段编码文库的免疫球蛋白轻链(LC)双链DNA片段文库，其中至少一个CDR片段文库源自所述模板抗体，并且每个FW片段文库[[源]]自从功能表达的人抗体获得的人框架集合[[限于序列]]；

(c)通过以FW1-CDR1-FW2-CDR2-FW3-CDR3的顺序逐步液相连接重链FW编码片段和CDR编码片段由所述HC片段文库组装，以产生人源化HC可变结构域编码文库；

(c)通过以FW1-CDR1-FW2-CDR2-FW3-CDR3的顺序逐步液相连接轻链FW编码片段和CDR编码片段由所述LC片段文库组装，以产生人源化LC可变结构域编码文库；

(d)将所述组装的人源化重链可变结构域文库和组装的轻链可变结构域文库克隆至表达载体中，以形成人源化文库；

(e)将所述人源化文库转染至细胞中；

(f)在所述细胞中表达全长人源化抗体，以形成人源化抗体文库；

(g)筛选所述人源化抗体文库，以测定所述人源化抗体的表达水平；和

(h)筛选所述人源化抗体文库，以测定与所述模板抗体对抗原的亲和性相比的所述人源化抗体对抗原的亲和性。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述载体包含编码HC框架区4的核酸序列。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述编码框架4的核苷酸序列源自从功能表达的人抗体获得的人重链可变结构域。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述载体包含编码LC框架区4的核酸序列。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述编码框架4的核苷酸序列源自从功能表达的人抗体获得的人轻链可变结构域。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述人源化抗体文库的成员数量为10,000,000个成员或更少。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述人源化抗体文库的成员数量为1,000,000个成员或更少。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述人源化抗体文库的成员数量为100,000个成员或更少。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述克隆步骤包括将所述组装的人源化HC可变结构域文库克隆至所述表达载体中，以形成载体-HC可变结构域DNA文库，并且将所述组装的轻链可变结构域文库连接至载体-HC文库中，以形成所述人源化文库。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述表达步骤包括由单个启动子表达所述人源化重链可变结构域和所述人源化轻链可变结构域。

11.如权利要求1所述的方法，还包括筛选与所述模板抗体相比具有一种或多种其他改善的特征的人源化抗体的步骤；所述一种或多种特征选自：平衡离解常数(K_D)；稳定性；解链温度(T_m)；pI；溶解度；表达水平；降低的免疫原性和提高的效应子功能，[[其中所述改善相对于模板抗体为约1%至500%，或相对于模板抗体为约2倍至1000倍]]。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞选自真核细胞生产宿主细胞系，所述细胞系选自：3T3小鼠成纤维细胞；BHK21叙利亚仓鼠成纤维细胞；MDCK，狗上皮细胞；Hela人上皮细胞；PtK1鼠袋鼠上皮细胞；SP2/0小鼠浆细胞；和NS0小鼠浆细胞；HEK293人胚肾细胞；COS猴肾细胞；CHO、CHO-S中国仓鼠卵巢细胞；R1小鼠胚细胞；E14.1小鼠胚细胞；H1人胚细胞；H9人胚细胞；PER C.6，人胚细胞；酿酒酵母(S.cerevisiae)酵母细胞；和毕赤酵母细胞。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述真核细胞生产宿主细胞系是CHO-S或HEK293。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述真核细胞生产宿主细胞系是CHOK1SV或NS0。