[发明专利]将蛋白固定到自组装膜上的方法

说明书

技术领域

本发明涉及将蛋白固定到自组装膜上的方法。

背景技术

为了对试样中所含的靶物质进行检测或定量，使用生物传感器。几种生物传感器为了对靶物质进行检测或定量而具备能够与靶物质结合的蛋白。具体地，对抗原进行检测或定量的生物传感器具备能够与该抗原特异性结合的抗体。同样地，对生物素及葡萄糖进行检测或定量的生物传感器分别具备链霉亲和素及葡萄糖氧化酶。

当含有靶物质的试样被供给至具备能够与靶物质结合的蛋白的生物传感器时，靶物质与蛋白结合，由此被检测或定量。

专利文献1公开了具备蛋白的现有的生物传感器。该专利文献1与日本特表2002-520618号公报对应（参照专利文献1的第24页第23行～第26行、第25页第3行～第20行、第25页第27行～第26页第13行、及第26页第14行～第22行、第28页第21行～第23行、或者对应公报的第0080、0082、0084、0085、0095、0109、0118及0119段）。图2表示专利文献1的图7所公开的生物传感器。

根据专利文献1的与图7有关的描述，该生物传感器用于对生物体分子的活性进行筛选。该生物传感器具备单层7、亲和性标记物8、衔接子分子9及蛋白10。单层7由化学式X-R-Y表示的自组装膜构成（参照专利文献1的第24页第23行～第26行、第25页第3行～第20行、第25页第27行～第26页第13行及第26页第14行～第22行。或者，参照对应公报的第0080、0082、0084、0085段）。X、R及Y的一个例子分别是HS-、链烷基及羧基（参照专利文献1的第25页第3行～第20行、第25页第27行～第26页第13行及第28页第21行～第23行。或者参照对应公报的第0084、0085及0095段）。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第00/04382号公报

发明内容

发明欲解决的课题

为了提高靶物质的检测灵敏度或定量精度，需要增加该生物传感器上所固定的蛋白的量。

本发明者发现，通过使选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的组中的1分子氨基酸与自组装膜键合，然后将蛋白固定，能够显著增加每单位面积的蛋白的固定量。本发明是基于该认识而完成的。

本发明的目的在于提供使自组装膜上所固定的蛋白的量增加的方法、及具有通过该方法固定的蛋白的传感器。

用于解决课题的手段

以下的项1～9所述的方法或传感器解决了上述课题。

（1）一种将蛋白固定到自组装膜上的方法，其具备以下的工序：

工序（a）：准备具备1分子氨基酸及自组装膜的基材，其中，

所述1分子氨基酸通过以下的化学式（I）所示的肽键与所述自组装膜键合，

（R表示所述1分子氨基酸的侧链）

所述1分子氨基酸选自由半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸、苯丙氨酸及甘氨酸组成的5种氨基酸；

工序（b）：将蛋白供给到所述基材上，以所述1分子氨基酸的羧基与所述蛋白的氨基的反应的形式，形成以下的化学式（II）所示的肽键；

（R表示所述1分子氨基酸的侧链）。

（2）根据项1所述的方法，其中，所述工序（a）具备以下的工序（a1）及（a2）：

工序（a1）：准备表面上具备自组装膜的基材，其中，所述自组装膜在一端具有羧基，

工序（a2）：将所述1分子氨基酸供给到所述基材上，以所述化学式（I）所示的所述自组装膜的一端的所述羧基与所述1分子氨基酸的氨基之间的反应的形式，形成肽键。

（3）根据项1所述的方法，其中，所述工序（a）及所述工序（b）之间还具备所述工序（ab）：

工序（ab）：将所述1分子氨基酸的羧基用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液活化。

（4）根据项2所述的方法，其中，所述工序（a1）及所述工序（a2）之间还具备所述工序（a1a）：

工序（a1b）：将所述自组装膜的羧基用N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐的混合液活化。

（5）根据项1所述的方法，其中，所述化学式（II）如以下的化学式（III）所示：

（R表示所述1分子氨基酸的侧链）。

（6）一种传感器，其具备自组装膜、1分子氨基酸及蛋白，其中，