[发明专利]能够抑制幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞的新德式乳杆菌保加利亚亚种菌株

说明书

本发明涉及益生菌领域。具体地说，本发明涉及用于治疗或预防幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染的新德式乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)菌株。

根据美国国家酸奶协会(NYA)或国际生命科学会(ILSI)最近批准的定义，益生菌是在以充足量消化时发挥超出基本营养之外的健康益处的活微生物。在属于乳品工业常用的属乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、链球菌属(Streptococcus)和乳球菌属(Lactococcus)的种类中已描述了益生菌。认为益生菌通过阻止致病微生物的发展和/或更直接地作用于免疫系统而在肠道微生物丛水平上进行干预。

幽门螺杆菌(H.pylori)是革兰氏阴性螺旋形细菌，其寄居在超过50%世界人口的人胃粘液层中。而被幽门螺杆菌感染的大多数个体是无症状的，虽然他们的胃上皮出现炎症体征，15%至20%的幽门螺杆菌感染个体出现疾病。实际上，幽门螺杆菌是慢性活动性胃炎、消化性溃疡疾病、萎缩、化生、发育异常、胃癌和胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的主要病原体(参见综述Fox和Wang，2007以及Polk和Peek，2010)。

在感染期间，幽门螺杆菌特通过该细菌产生的多个粘附分子(粘附素)如BabA和SabA蛋白特异性地与内衬胃上皮的胃上皮细胞结合。粘附至胃上皮细胞使细菌免受流体流动、蠕动和粘液层的脱落。幽门螺杆菌粘附至胃粘膜诱导胃上皮细胞内的信号转导途径，通过氧化应激、细胞凋亡和/或自体吞噬机制造成胃上皮细胞损伤和萎缩。因此，幽门螺杆菌粘附至胃上皮细胞是建立胃粘膜感染的关键步骤。

对幽门螺杆菌感染患者的标准治疗是两种抗生素联合质子泵抑制剂(PPI)，所谓的三联疗法。然而，由于抗生素耐药性或较差的顺应性，三联疗法治疗后的幽门螺杆菌的根除率在下降。此外，尽管有几次临床试验，目前尚无有效的疫苗上市。

由上述内容可见，需要对用于治疗或预防幽门螺杆菌感染的三联疗法的替代疗法或补充疗法。

已提出使用产生乳酸、细菌素和其它抗菌物质的益生乳酸菌(LAB)作为替代疗法。Boyanova等人(2009)已发现几种德式乳杆菌保加利亚亚种(L.bulgaricus)菌株，其以菌株依赖性方式在体外(使用琼脂孔扩散法)抑制幽门螺杆菌菌株包括耐抗生素菌株的生长。然而，所研究的德式乳杆菌保加利亚亚种菌株未被明确鉴定出来，且是公众不能获得的。Simova等人(2009)筛选了几种产生细菌素的乳酸菌。之后，他们通过采用两种体外方法（琼脂孔扩散法及Barefoot和Klaenhammer的临界稀释试验）来分析这些菌株的无细胞上清液(CFS)的抗微生物活性而测定了所述菌株的抗微生物活性。他们发现，由于其抗微生物活性，德式乳杆菌保加利亚亚种BB18菌株的CFS抑制了广谱致病微生物(细菌或酵母菌)包括幽门螺杆菌菌株的生长。

本申请发明人分离了一种新的德式乳杆菌保加利亚亚种菌株并发现该菌株在体外和体内抑制幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞。这种德式乳杆菌保加利亚亚种菌株(命名为DN_100_0602或CNCM I-4428)因而能够用于通过靶向建立这一感染的主要步骤(即通过抑制幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞)治疗或预防幽门螺杆菌感染。

因此，本申请的保护主题是根据布达佩斯条约于2011年2月3日在CNCM(国家培养物和微生物保藏中心(（Collection Nationale de Cultures de Microorganismes)，25rue du Docteur Roux，巴黎)以保藏号CNCM I-4428保藏的菌株德式乳杆菌保加利亚亚种。

该菌株CNCM I-4428具有以下特性：

-形态学：革兰氏阳性微生物，不动的、杆状的、具有颗粒的长杆菌，

-代谢：同型发酵(homofermentive)，过氧化氢酶(-)，

-糖发酵(在37℃下在MRS培养基中采用API50CH试验持续48h获得的结果)：葡萄糖、果糖、甘露糖和乳糖。

此外，该菌株能够在体外和体内抑制幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞。

如本文所用，术语“抑制幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞”是指显著抑制(即全部或部分抑制)幽门螺杆菌菌株粘附至上皮细胞。可以如下面实施例1中所示在体外测量幽门螺杆菌菌株对上皮细胞粘附的抑制。