[发明专利]用于监测、诊断和/或预后早期急性肾损伤的方法

权利要求书

1.用于在患有早期急性肾损伤的受试者中监测、诊断和/或预后所述早期急性肾损伤以及确定疗法的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供尿样；

(b)使用至少一个免疫纯化步骤使所述尿样富集存在于所述尿样中的外来体；

(c)检测和/或定量外来体中急性肾损伤(AKI)标记物。

2.根据权利要求1的方法，其中所述免疫纯化步骤的进行是采用针对优先并差异表达于不同肾脏结构的表面中的蛋白质的胞内域、胞外域或任意域的抗体。

3.根据权利要求2的方法，其中所述用于免疫纯化步骤的抗体选自抗水通道蛋白1(抗AQP1)、抗水通道蛋白2(抗AQP2)和抗水通道蛋白3(抗AQP3)、抗NKCC2、抗NHE-3、抗NaPiII或其组合。

4.根据权利要求3的方法，其中所述用于免疫纯化步骤的抗体针对水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白3(AQP3)、NKCC2、NHE-3和NaPiII的任意域。

5.根据权利要求4的方法，其中使所述尿样富集外来体包括在免疫纯化之前，用于富集外来体的至少一个进一步的手段。

6.根据权利要求5的方法，其中用于使所述尿样富集外来体的进一步的手段为离心步骤、微量过滤步骤或其组合，因此产生脱细胞尿样。

7.根据权利要求6的方法，其中所述离心是在5000至10000rpm进行5至30分钟。

8.根据权利要求6或7的方法，其中所述离心步骤是在两阶段中进行。

9.根据权利要求8的方法，其中第二离心步骤是在30000至45000rpm进行30至120分钟的超速离心步骤，因此产生总外来体部分。

10.根据权利要求6的方法，其中所述微量过滤步骤使用最高达0.22微米的微量过滤器，因此产生脱细胞尿样。

11.根据权利要求1的方法，其中所述急性肾损伤标记物选自NGAL、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-3、KIM-1、IL-1β、IL-18或其组合。

12.根据权利要求1的方法，其中通过采用抗NGAL、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-3、KIM-1、IL-1β、IL-18的一级抗体的免疫反应来进行检测。

13.根据权利要求12的方法，其中所述一级抗体是标记的。

14.根据权利要求1的方法，其中通过检测针对一级抗体的经标记二级抗体来进行检测，所述一级抗体针对NGAL、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-3、KIM-1、IL-1β、IL-18。

15.根据权利要求12或13的方法，其中所述抗体标记物选自酶、荧光化合物、红外化合物、放射性化合物、化学化合物。

16.根据权利要求15的方法，进一步包括在受试者中评价急性肾损伤的步骤，其用于根据所述特定肾损伤标记物的存在和/或水平监测、诊断、预后和/或确定受试者中的疗法。

17.用于评价早期急性肾损伤的试剂盒，所述试剂盒包括：

(a)用于使用至少一个免疫纯化步骤使尿样富集外来体的手段；

(b)检测急性肾损伤(AKI)标记物的手段。

18.根据权利要求17的试剂盒，进一步包括(c)用于获得尿样的手段。

19.根据权利要求17的试剂盒，其中用于所述免疫纯化步骤的所述抗体选自抗水通道蛋白1(抗AQP1)、抗水通道蛋白2(抗AQP2)和抗水通道蛋白3(抗AQP3)、抗NKCC2、抗NHE-3、抗NaPiII或其组合。

20.根据权利要求19的试剂盒，其中用于所述免疫纯化步骤的所述抗体针对水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白3(AQP3)、NKCC2、NHE-3和NaPiII的任意域。

21.根据权利要求20的试剂盒，其中使所述尿样富集外来体包括在免疫纯化之前，用于富集外来体的至少一个进一步的手段。