[发明专利]诊断方法

说明书

发明背景

由于在牙医和患者中对侵蚀及其影响的认识增加，因此有正确诊断侵蚀的来源并鉴定对侵蚀有升高的易感性的个体的方法的需要。与由于长时间暴露于细菌酸产生局部很深的亚表面病灶的龋齿不同，侵蚀是由以下原因造成：由于短且频繁暴露于低pH膳食酸，整个牙釉质表面的溶解和软化，导致软化和微米级矿物质的流失，尤其是当用研磨剂牙膏刷牙后。膳食酸例如柠檬酸是特别有害的，不仅由于其酸性pH，而且由于其钙螯合能力，其引发进一步的牙釉质溶解。

获得性牙釉质表膜(AEP)针对对牙釉质的酸攻击，天然地提供了一些保护。AEP包含钙离子、磷酸根离子以及蛋白质和酶。表膜的形成是一个复杂的多步骤过程，其中前体蛋白例如富酪蛋白和富含脯氨酸的蛋白最初结合并为其它蛋白(粘蛋白等)提供结合位点。成熟涉及表膜蛋白质的交联和去磷酸化以及2小时后在后期牙斑菌的结合。表膜的组成高度依赖于唾液含量，其随流速、刺激、每天的不同时间、膳食等而变化。唾液流速极大地影响了唾液的pH、离子成分和缓冲能力。

侵蚀可源自数种条件-频繁暴露于膳食酸、胃酸或缺乏足够的唾液(口干症)。患有胃糜烂的患者通常通过糜烂损伤的严重性和位置(上腭表面)的评价来鉴定，而患有口干症的那些则通过目测唾液和测量唾液流速来鉴定。侵蚀和酸性饮料的摄入量增加、较低的唾液流速和由较低的唾液流速造成的较低的唾液pH /缓冲能力之间存在联系。然而，一些具有正常唾液流速且无胃酸暴露迹象的患者仍患有膳食性侵蚀损伤，即使当暴露于膳食酸被最小化时，这表明对侵蚀的易感性升高，可能与其AEP有关。存在用于鉴定该高度易感患者的亚群以正确治疗的简单和可靠的方法的需要，以及用于鉴定患者以临床研究评价口腔护理活性物质减少、减轻和控制来自膳食酸的牙本质侵蚀的方法的需要。

发明简述

出乎意料的是，已发现对膳食性牙釉质侵蚀具有高易感性的患者表现出相对于具有相似唾液流速和膳食的健康对照组，1)整个口腔唾液中显著较低的粘蛋白5B、碳酸酐酶6和/或较高的富酪蛋白水平，和2) AEP中显著较低的总蛋白、富酪蛋白和/或钙浓度。利用基于总蛋白浓度、钙分析及蛋白鉴定的唾液和表膜的诊断方法，这些因素可用于鉴定对侵蚀易感的患者。由于测试样品为唾液和唾液表膜，样品收集是容易的且存在与蛋白及矿物质含量相关的丰富信息。

因此，本发明的一些实施方案提供了用于鉴定对牙釉质侵蚀具有升高的易感性的患者的方法，其包括以下步骤的一个或两个： 

(i)从患者获得整个口腔唾液的样品并检测所述唾液中粘蛋白5B水平、碳酸酐酶6水平和富酪蛋白水平中的一个或多个，其中相对于对照值，较低的粘蛋白5B、较低的碳酸酐酶和/或较高的富酪蛋白水平各自表示对牙釉质侵蚀的易感性升高；和

(ii)从患者获得获得性牙釉质表膜(AEP)的样品并测量所述AEP中总蛋白浓度、富酪蛋白浓度和钙浓度中的一个或多个，其中相对于对照值，每个这些物质的较低水平各自表示对牙釉质侵蚀的易感性升高。

在一些实施方案中，所述侵蚀的病因是膳食。

本发明应用的其它领域将在以下提供的详述中变得显而易见。应理解的是，详述和具体实施例，当表示本发明的优选实施方案时，仅旨在说明的目的，而并非旨在限制本发明的范围。

发明详述

一个或多个优选实施方案的以下描述在本质上仅为示例性的，并且不以任何方式意图限制本发明的范围、其应用或用途。

因此本发明的一些实施方案提供了用于鉴定对牙釉质侵蚀具有升高的易感性的患者的方法(方法1)，包括测量以下的一种或多种，例如以下任何2、3、4或5种，例如全部6种：

(i)在来自患者的整个口腔唾液例如未刺激的整个口腔唾液(UWMS)的样品中测量粘蛋白5B的浓度，其中相对于对照值，较低的粘蛋白5B的浓度表示对牙釉质侵蚀的易感性升高；

(ii)在来自患者的整个口腔唾液例如未刺激的整个口腔唾液(UWMS)的样品中测量碳酸酐酶6的浓度，其中相对于对照值，较低的碳酸酐酶6的浓度表示对牙釉质侵蚀的易感性升高；

(iii)在来自患者的整个口腔唾液例如未刺激的整个口腔唾液(UWMS)的样品中测量富酪蛋白的浓度，其中相对于对照值，较高的富酪蛋白的浓度表示对牙釉质侵蚀的易感性升高；

(iv)在来自患者的获得性牙釉质表膜(AEP)样品中测量总蛋白的浓度，其中相对于对照值，较低的总蛋白浓度表示对牙釉质侵蚀的易感性升高；