[发明专利]植物中间苯三酚类分子印迹聚合物的制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及化工分离技术领域，具体是间苯三酚类分子印迹聚合物的制备及利用该聚合物为柱层析填料进行植物中贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素等物质的分离和纯化。

背景技术

间苯三酚类物质广泛存在于植物中，该类物质具有抗抑郁、抗菌、抗肿瘤、抗阿尔茨海默病和促进学习记忆等药理活性，它们的稳定性较差，对光、热和氧气非常敏感，常温下存放几天就可被完全氧化。在贯叶连翘中该类物质主要为贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素，前者在全草中的含量为2%-4.5%，后者的含量仅为0.2%-1.9%。二者的结构非常相似，加贯叶金丝桃素仅比贯叶金丝桃素多一个甲基，且与后者具有类似的药理活性。

由于其化学不稳定性，该类物质对提取条件较为敏感，常用的回流和索氏提取法都很难满足其提取的要求。与传统的热浸法相比，超声波提取法具有提取时间短、提取率高、无需加热，避免高温对所提取成分的破坏以及提取设备便于推广等优点。其他的提取方法，如超临界萃取等方法虽然也取得了良好的效果，但提取的成本较高，难以在实际生产中推广使用。

该类物质的分离方法主要有以下几种方法。第一种方法是采用薄层色谱法进行粗提物的分离，常采用的固定相为薄层层析硅胶GF254，展开剂为不同比例混合溶剂。该方法虽然较为简便，但所得产物的纯度较低。其次是基于硅胶柱的柱层析和制备色谱法，一般采用的流动相为不同比例的混合溶剂，粗提物经过分离和精制后其纯度可达到98%以上。再者是采用加速溶剂萃取和高速逆流色谱法。上述方法均能得到一定纯度的目标化合物，但分离过程复杂，缺乏特异性，有机溶剂用量较大，所需时间和成本较高。

分子印迹技术作为一种能够获得在空间和结合位点上与某种分子完全匹配的聚合物的制备技术，具有构效的预定性、识别的特异性和广泛的实用性。而且由于分子印迹聚合物对目标分子具有高度的选择性识别作用，较生物性抗体具有稳定性和重复性好、耐极端环境能力强、制备过程简便、成本低廉，因此将印迹聚合物用于待测物质的亲和识别和富集较其他方法具有极大的优势，目前已展示出诱人的前景。

参考文献的报道，采用氧化还原引发剂低温引发制备间苯三酚类分子印迹聚合物微球，所制备的微球经漂洗、过筛、洗脱和干燥等一系列处理后，再通过紫外分光光度法对其进行评价分析即可制备出具有高效识别性能的聚合物材料。而后采用湿法进行亲和识别柱的装填和预处理，提取物经浓缩后上样，即可简便快速地分离和纯化出含量和纯度较高的间苯三酚类化合物。

发明内容

本发明的目的在于克服现有分离纯化方法的不足，提出一种间苯三酚类分子印迹聚合物的制备方法，本发明还包含所述的聚合物在植物中间苯三酚类物质分离纯化上的应用。

植物中间苯三酚类分子印迹聚合物的制备及应用，其步骤如下：

1）先将聚乙烯醇400加入蒸馏水中，加热至95℃使其溶解，形成浓度为3%-8%聚乙烯醇400溶液（优选的为4%-6%），冷却至室温，然后转至三口烧瓶中；

2）将模板分子溶解于致孔剂中，加入功能单体，得到混合溶液；所述的模板分子为常山酮，致孔剂为乙腈，功能单体为甲基丙烯酸、丙稀酰胺、4-乙烯基吡啶和甲基丙烯酸酯中的一种或两种的组合；所述的模板分子和功能单体的摩尔比为1:4-8，模板分子在致孔剂中的摩尔浓度为2.5mmol/L-5mmol/L； 

3）将步骤2）的混合溶液用超声清洗仪超声5min，混合均匀，放入4℃冰箱孵育24h，得到预聚合体系；

4）将步骤3）的预聚合体系置于冰水浴中，加入交联剂和引发剂，用超声清洗仪超声5min，通入氮气5min，而后在氮气气氛或真空状态下密封；所述的交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯或乙二醇二甲基丙烯酸酯，作为优选该交联剂是三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，加入量为功能单体摩尔量的5倍，所述的引发剂是等摩尔比的过氧化苯甲酰和N，N-二甲基苯胺，加入量为功能单体摩尔量的0.2倍； 

5）将步骤4）形成的混合溶液在搅拌和氮气保护下慢慢滴加到步骤1）的三口烧瓶中引发聚合，引发温度为10℃-30℃，聚合时间为6h-36h（优选引发温度为18℃-25℃，聚合时间为12h-24h），使其形成乳白色的微悬浮乳液，即为印迹聚合物微球；