[发明专利]一种抗禽流感卵黄抗体注射液及其用途

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，涉及一种卵黄抗体制剂及其应用，具体地说是一种抗禽流感卵黄抗体注射液及其用途。

背景技术

禽流感是流感病毒引起的家禽的一种急性、高度致死性传染病，目前本病主要是通过免疫接种禽流感疫苗来进行预防。但是，由于肉仔鸡饲养周期较短，禽流感疫苗均为灭活苗，到出栏前尚未吸收完全，肌肉中形成许多小结节，必然会影响鸡肉的品质。

发明内容

本发明要解决的技术问题，是提供一种抗禽流感卵黄抗体注射液及其用途。

本发明所制备的抗禽流感卵黄抗体为免疫球蛋白，属于蛋白质，分子量较小，使得注射液进入体内后容易被机体吸收，肌肉不易产生结节；通过提高肉仔鸡机体禽流感的抗体水平来预防禽流感，抗禽流感卵黄抗体注射液在肉仔鸡上使用，药力更直接、药效更快，预防禽流感，操作方便、灵活、效果好，而且有助于鸡肉产品质量的提高。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

1、所用试剂

硫酸铵（分析纯、纯度≥99.0%）；硫柳汞（分析纯、纯度≥98.0%）；新流H9二联油苗（生产厂家：扬州威克生物工程有限公司）；禽流感H5N1-4-5油苗（生产厂家：哈尔滨维科生物技术开发公司）；禽流感H9（生产厂家：扬州威克生物工程有限公司）

2、制备方法

一种抗禽流感卵黄抗体注射液，该注射液的制备方法按照以下步骤顺序进行：

①  诱导产生抗禽流感抗体

用禽流感疫苗按免疫程序免疫产蛋母鸡进行免疫注射，诱导免疫母鸡产生抗禽流感抗体；

②  禽流感卵黄抗体注射液的制备

收集免疫产蛋母鸡卵黄后，再对卵黄抗体进行提取和纯化，即得抗禽流感卵黄抗体注射液。

作为本发明的一种限定，所述免疫程序为：

Ⅰ、母源抗体低时，不同日龄段的免疫方法：

7日龄：免疫新流H9二联油苗0.2mL；15日龄：免疫禽流感H5N1-4-5油苗0.3mL；

Ⅱ、母源抗体高时，不同日龄段的免疫方法：

14日龄：免疫新流H9二联油苗0.2mL；

21日龄：免疫禽流感H5N1-4-5油苗0.3mL；

40日龄：免疫新流H9二联油苗或禽流感H9 0.5mL；

50日龄：免疫禽流感H5N1-4-5油苗0.5mL；

110日龄：免疫新流H9二联油苗或禽流感H9 1mL；

130日龄：免疫禽流感H5N1-4-5油苗1mL；

Ⅲ、以后每隔60天使用禽流感H5N1-4-5油苗进行一次加强免疫，每隔80天使用禽流感H9进行一次加强免疫，对产蛋母鸡进行免疫，再提取免疫产蛋母鸡卵黄制备。

作为本发明的另一种限定，所述提取纯化和注射液的制备方法按照以下步骤顺序进行：

（1）卵黄的分离

将高免鸡蛋消毒，在无菌条件下打破蛋壳，分离出卵黄；

（2）上清液的提取

将蛋黄倒入已灭菌的容器内，加入缓冲液调节pH值为5.5-7.5，匀浆后，0-4℃静止3-4h或过夜，收取上清液；

（3）沉淀的收集

上清液中加入25-40%的硫酸铵，5000r/min离心30min，0-4℃静止3-4h或过夜，收集沉淀；

（4）注射液的制备

加原上清液体积的10%的注射用水，使沉淀溶解，加入0.01%的防腐保鲜剂，0.22微米滤膜过滤除菌，制成注射液，冷冻保存。

作为进一步限定，所述缓冲液为乙酸和乙酸钠。

本发明还有一种限定，所述防腐保鲜剂为硫柳汞。

本发明还提供了上述抗禽流感卵黄抗体注射液的一种用途，即将所述抗禽流感卵黄抗体注射液用于预防肉仔鸡禽流感。

所述抗禽流感卵黄抗体注射液按照肉仔鸡每1kg体重0.2-0.5mL的量进行肌内注射。

抗禽流感卵黄抗体注射液的应用：对于所制得的上述抗禽流感卵黄抗体注射液，检测应用效果，通过对比试验和采用血凝抑制试验来测定抗体效价，来对所制得的注射液的应用效果进行评定，其中检测方法参照国标：GB/T 14926.54-2001 试验动物的血凝抑制试验。

对比试验：将120只肉仔鸡分为三组，分别为：25日龄未注射这种抗禽流感卵黄抗体注射液而免疫禽流感疫苗、25日龄未注射这种抗禽流感卵黄抗体注射液而未免疫禽流感疫苗的肉仔鸡和25日龄肉仔鸡三组在30日龄攻毒禽流感抗原0.2mL/只，其它饲养条件一样，观察至出栏，结果如下表所示：