[发明专利]一种养血清脑颗粒蒽醌类成分检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种中药有效成分的检测方法，特别涉及一种养血清脑颗粒蒽醌类成分检测方法。

背景技术：

养血清脑颗粒是由天津天士力制药股份有限公司生产的一种复方中药，以川芎、当归为君药，由11味中药采用现代化制剂工艺精制而成。养血清脑颗粒可以改善软脑膜微循环，增加脑血流量，缓解血管痉挛与止痛，具有养血平肝、活血通络之功效。根据文献报道，决明子中蒽醌类成分具有降血压、降血脂、抗动脉粥样硬化等功效。

养血清脑颗粒其处方如下：

主药：当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛。

辅料为：糊精、甜菊素。

决明子是养血清脑颗粒中的重要药味之一，其中主要成分为蒽醌类成分包括：大黄酚(Chrysophanol)、大黄素(Emodin)、芦荟大黄素(Aloeemodin)、大黄酸(Rhein)、橙黄决明素(Aurantio-obtusin，即1，7-二甲氧基-2，6，8-三羟-3-甲基蒽醌)、大黄酚-四吡喃葡萄糖苷(chrysophanol-tetra-β-D-glucopyranoside)3-甲基-2-羟基-1，6，7，8-四甲氧基蒽醌(2-hydroxy-1，6，7，8-tetramethoxy-3-methylanthraquinone)及3-甲基-2，8-二羟基-1，6，7-三甲氧基蒽醌(2，8-dihydroxy-1，6，7-trimethoxy-3-methylanthraquinone)等。

为对养血清脑颗粒中的蒽醌类成分进行检测和分析，本发明对养血清脑颗粒中的化学成分进行分析与研究。以蒽醌部位为研究对象，为制定新的质量标准和有效控制产品质量提供了依据。

发明内容：

本发明经过筛选，获得一种灵敏度高，检测准确，操作简单，成本低廉的养血清脑颗粒蒽醌类成分检测方法。

本发明的检测方法，包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备；

步骤2，供试品溶液的制备；

步骤3，注入液相色谱-质谱联用色谱仪，得到色谱图；

步骤4，根据色谱图得到供试品溶液中蒽醌类成分的种类。

根据本发明的检测方法，其中步骤1所述对照品采用橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素和大黄酚。

根据本发明的检测方法，其中，

步骤1所述对照品溶液的制备，步骤如下：准确称取上述对照品(橙黄决明素5.1mg，芦荟大黄素2.85mg，大黄素5.01mg，大黄酚4.18mg)置于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为对照品溶液。

根据本发明的检测方法，其中步骤2所述供试品溶液采用D101大孔树脂柱和聚酰胺柱制备。

步骤2所述供试品溶液的制备，步骤如下：

精密称取未加入辅料的养血清脑颗粒浸膏100g，用20％的乙醇溶解，以D101大孔树脂柱层析分离，20％乙醇(5bv)、95％乙醇(5bv)分别洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将可能的药效物质进行富集。将95％乙醇洗脱液浓缩，用30％乙醇溶液溶解，以100-200目的聚酰胺柱层析分离，30％乙醇(5bv)、95％乙醇(5bv)分别洗脱。收集95％乙醇洗脱液即为目标蒽醌部位。

根据本发明的方法，其中步骤3中所述色谱仪为液相色谱-质谱联用仪器，色谱条件如下：

液相条件：色谱柱PhenomenexC₁₈(250×4.60mm，Gemini 5μm)；流动相A为乙腈，流动相B为0.5％的甲酸-水，采用梯度洗脱。体积流量为1.0ml/min，检测波长为254nm，190-500nm全波长扫描，柱温为30℃，进样量10μl；

质谱条件：检测模式为电喷雾离子化(ESI)方式，检测离子为正、负离子，扫描范围100-1000m/z，干燥气的流量为8L/min，干燥气的温度为350℃，雾化气的压力为35psi。

其中，流动相梯度洗脱程序如下：

根据本发明的方法，包括以下步骤：

步骤1，对照品溶液的制备

称取对照品橙黄决明素5.1mg，芦荟大黄素2.85mg，大黄素5.01mg，大黄酚4.18mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为对照品溶液；

步骤2，供试品溶液的制备