[发明专利]一种瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(HPLC)定量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种咖啡因含量的测定方法，具体涉及一种瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(HPLC)定量测定方法。 

背景技术

瓜拉那是亚马逊地区特产的一种野莓，内含天然绿色咖啡因、维生素，以及丰富的生物碱、单宁酸、蛋白质等。利用其所制成的饮料风味独特，也是一种健康饮料。瓜拉那是英文名guarana的音译，是无患子科的木质藤本植物，药用部分为种子。其产于巴西亚马孙河流域的热带森林，是亚马孙地区特有的一种经济作物。它所含的天然咖啡因是咖啡豆的2-4.5倍，能够逐渐而缓慢地刺激神经，刺激维持的有效期长，而且刺激比较温和，对人体没有危害，而其他咖啡因来源的植物如咖啡豆、茶叶的对神经的刺激作用通常起效快，但持续时间短。瓜拉纳在主产地巴西已被广泛用于食品、饮料和制药工业中，但在国内鲜有报道，开发前景无限。 

咖啡因(Caffeine)，又称咖啡碱，是一种白色生物碱，学名“1，2，3-三甲基黄嘌呤”，其结构为C₁₈H₁₀N₄O₂H₂O，分子量为194.19，通常得自咖啡和茶，在药品中主要作为温和兴奋剂及治疗特定的头痛病。因此，对其含量的测定是非常重要的。纯的咖啡因是白色的，具有强烈苦状的粉状物，熔点238℃，升华温度178℃，易溶于水、乙醇、丙酮及氯仿等有机溶剂，其分子结构式如下所述： 

适度地使用咖啡因有祛除疲劳、兴奋神经的作用，但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状，甚至导致吸食者下一代智能低下，肢体畸形，因此也被列入受国家管制的精神药品范围。GB2760-2007食品添加剂使用标准中明确规定了不同用途中咖啡因的使用量限定，可乐型碳酸饮料中咖啡因的最大使用量为0.15g/kg。因此，定量测定咖啡因的含量是十分重要的。 

高效液相色谱法是现代色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样微量、快速、仿生物条件的分析。该方法已成为化学、药学、工业、农学等学科领域中重要的分离分析技术。 

在国内，对咖啡豆、茶叶及其制品中咖啡因含量的测定方法方面已经有了很多报道。 

李春平等(反相液相色谱法测定咖啡豆中咖啡碱含量，李春平，贺明鑫，云南热作科技，2000，23(3)：10-12。)报道了一种反相高效液相色谱法测定咖啡豆中咖啡因含量的方法。采用反相高效液相色谱外标法对咖啡豆中的咖啡因进行定量测定，方法的变异系数为0.067，线性相关系数为0.9999，回收率为99.83％～100.67。 

李萌等(HPLC法快色测定茶多酚中儿茶素类及咖啡因含量，李萌，王华 燕，胡文祥，刘接卿，Chinese Journal Of Medicinal Guide，2007，9(6)：506-507)报道了一种HPLC法测定茶多酚中儿茶素类及咖啡因含量的方法。该方法采用C18色谱柱，流动相为水∶甲醇∶乙酸＝73∶23∶2的等度洗脱反相PHLC法在16min内完成检测。结果：样品分析时，除EGCG的色谱峰分离度大于1，其他组分的分离度均大于1.5，各组分的加样回收率在99.88％～101.85％之间，该方法准确、稳定、重复性好，可正确定量茶多酚中的5种组分。 

目前，关于瓜拉那果粉中咖啡因的分析方法，文献中鲜有报道，目前对此研究还很少，因此，研究一种可以准确测定瓜拉那果粉中咖啡因含量的方法非常重要。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(HPLC)定量测定方法。所述方法具有稳定性好、线性关系好、重复性好、准确度及精密度高等优点。 

为了达到上述目的，本发明采用了如下技术方案： 

所述瓜拉那果粉中天然咖啡因的高效液相色谱(HPLC)定量测定方法，采用即外标法测定瓜拉那果粉中的咖啡因含量。 

HPLC测定咖啡因含量的原理如下所述： 

样品溶液进入液相色谱仪，流动相载着样品进入色谱柱并分离后依次达到检测器被识别；检测器测定样品中咖啡因吸收峰的响应值，并根据响应值和咖啡因标准样品的比较来计算样品中咖啡因的含量。