[发明专利]一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法

权利要求书

1.一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法，其特征在于通过以下步骤实现：

（1）黄浆水的收集、除杂：将豆腐等豆制品制作过程中的黄浆水收集后，使用多层纱布过滤或进行离心除去其中的杂质、固形物；

（2）黄浆水的pH调整：黄浆水自身酸性强，调整黄浆水的pH值为6.8-7.3；

（3）添加培养物、灭菌：将上述（2）中黄浆水添加质量体积百比为0.5-1%的葡萄糖、0.1%硫酸镁，采用121℃、30分钟高温高压灭菌法灭菌，然后灌装到发酵瓶中作为黄浆水培养基发酵培养；

（4）菌种的活化、种子培养：将耐辐射奇球菌R1划线接种于种子培养基TGY固体培养基上，28℃中培养36h，挑取单菌落接种于不含琼脂的液体种子培养基TGY中，30℃、220rpm/min培养至对数生长期；

（5）发酵培养：将步骤（4）中的液体种子接入步骤（3）中以黄浆水配制成的培养基进行发酵培养，30-32℃培养48h，至菌群稳定期；

（6）菌体细胞破壁：取出步骤（5）中菌体发酵液离心去上清，收集沉淀菌体，水洗湿菌体除去残留发酵液，加入物料体积比1：3的1.3M盐酸，100℃沸水中加热2min后迅速冷却进行细胞破壁，离心，沉淀菌体细胞水洗2次离心去上清，除去残留盐酸，收集菌体细胞；

（7）类胡萝卜素萃取：在步骤（6）的菌体细胞中加入物料质量/体积比为1：5的预冷有机溶剂乙醇，冰浴下5min萃取类胡萝卜素，离心收集上清，提取3次至菌体变白；

（8）类胡萝卜素干品制备：将步骤（7）中的类胡萝卜素提取液于真空离心浓缩干燥，干粉即为类胡萝卜素干品。

2.根据权利要求1所述的一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤（4）所述的菌种活化、种子培养至对数生长期，其OD₆₀₀值1.0；种子培养基TGY由0.5%蛋白胨、0.1%葡萄糖、0.3%酵母提取物、1.5%琼脂组成。

3.根据权利要求1所述的一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤（5）所述的发酵培养至菌群稳定期，其OD₆₀₀值8.0-8.5。

4.根据权利要求1所述的一种培养耐辐射奇球菌生产天然类胡萝卜素的方法，其特征在于，步骤（6）细胞破壁后离心，盐酸回收后重复使用。