[发明专利]椭圆嗜蓝孢孔菌子实体中一种具有抗肿瘤活性的化合物

说明书

技术领域：

本发明公开了一种从多孔菌科菌类椭圆嗜蓝孢孔菌中分离得的一种天然化合物——苯并[1，2-b；5，4-b’]二呋喃-3，5-二酮-8-甲酸甲酯的抗肿瘤活性，并提供其制备方法，研究表明该化合物对肝癌H₂₂荷瘤具有较好的抑制作用，且对免疫系统没有明显的负面影响。该研究属于生药有效成分提取制备及其在医药与保健品领域的应用方法，并为预防及治疗肿瘤药开发提供依据。

背景技术：

癌症(恶性肿瘤)是当前危害人类健康的重要疾病之一。据世界卫生组织统计，癌症已成为继心血管疾病之后的人类第二大疾病。全球每年约有600万人死于各种癌症，其中我国约130万人死于癌症，随着人口数量的增加和人口老龄化的加快，肿瘤发病率和死亡率也呈上升趋势。大型真菌入药在我国已经有两千多年的历史，世界上第一部药物专著《神农本草经》即记载了桑黄、灵芝、茯苓、雷丸、猪苓等药用真菌的药效，其具有抗肿瘤、抗病毒、降胆固醇、降血压、抗血小板凝集等活性，尤其抗肿瘤活性引人注目。

椭圆嗜蓝孢孔菌Fomitiporia ellipsoidea B.K.Cui&Y.C.Dai是于2006年从福建万木林自然保护区发现的新种，属于担子菌门Basidiomycotina，非褶菌目Aphyllophorales，多孔菌科Polyporaceae，嗜蓝孢孔菌属Fomitiporia。在福建中北部地区把椭圆嗜蓝孢孔菌当做“桑黄”来使用，是桑黄地方用药的一种。据《本草纲目》记载，桑黄味苦，能利五脏，软坚，排毒、止血活血等。现代研究认为“桑黄”具有良好的抗肿瘤活性。

发明内容：

本发明公开了一种天然化合物苯并[1，2-b；5，4-b’]二呋喃-3，5-二酮-8-甲酸甲酯的制备方法，具体如下：

椭圆嗜蓝孢孔菌子实体干燥后粉碎过40目筛，用石油醚回流脱脂。将已脱脂的椭圆嗜蓝孢孔菌粉末用甲醇45℃进行回流提取3-5次，每次8小时，加压回收甲醇，得到甲醇提取物。水混悬甲醇提取物，然后用乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取液，浓缩得到浸膏。

将以上得到浸膏用少量溶剂进行溶解，加入适量的粗硅胶(80-120目)，搅拌均匀后蒸干溶剂作为正相硅胶柱层析样品。使用氯仿∶甲醇100∶1为洗脱剂将样品进行硅胶柱层析，将接收液浓缩后用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇1∶1)反复纯化，即得化合物苯并[1，2-b；5，4-b’]二呋喃-3，5-二酮-8-甲酸甲酯。

苯并[1，2-b；5，4-b’]二呋喃-3，5-二酮-8-甲酸甲酯化学结构

本发明公开了一种天然化合物苯并[1，2-b；5，4-b’]二呋喃-3，5-二酮-8-甲酸甲酯的小鼠抗肿瘤活性的研究，方法与结果如下：

无菌条件下，取接种7d的种鼠腹水肝癌H₂₂细胞，用生理盐水制成细胞个数为1×10⁶-5×10⁶/mL的细胞悬液，以每鼠0.1mL接种于小鼠左后肢腋窝皮下，随机分组，每组10只。次日开始给药，阳性药组隔天腹腔注射环磷酰胺(25mg/kg)，体积为0.2mL/10g，受试药组(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)和对照组(生理盐水)灌胃给药，体积为0.2mL/10g，连续10d，第11天处死小鼠，摘取瘤块、胸腺和脾脏，分别称重。肿瘤抑制率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。胸腺指数为每g体重中胸腺的mg数，脾指数为每g体重中脾脏的mg数，各数值均以平均值±标准差来表示。通过软件spss 18.0统计分析数据的代表性，p＜0.05说明在统计学上差异显著，p＜0.01说明在统计学上差异极显著。

化合物体内抑瘤作用结果如下表1所示，各剂量均对肝癌H₂₂有明显的抑制作用。在剂量为5mg/kg时对肝癌H₂₂的抑制率达到40.48％，在给药量为10mg/kg时抑制率(49.14％)与阳性药CTX接近(52.53％)，当浓度为20mg/kg时抑制率(58.13％)高于阳性药CTX，抑瘤效果具有一定的量效关系，并和阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)。

表1化合物对H₂₂荷瘤小鼠的抑制率

与阴性对照组相比：^*p＜0.05，^**p＜0.01；