[发明专利]丝网印刷电极及多重修饰方法和检测玉米赤霉烯酮的方法

权利要求书

1.一种丝网印刷电极，其特征在于，所述丝网印刷电极的工作电极的工作区域涂覆有Nafion-多壁碳纳米管-胶体金-壳聚糖混合物膜层。

2.如权利要求1所述的丝网印刷电极，其特征在于，所述胶体金为16～18nm。

3.一种制备如权利要求1所述的丝网印刷电极的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将多壁碳纳米管活化，并和Nafion混合，制备Nafion-多壁碳纳米管；

步骤二、制备胶体金，利用壳聚糖将Nafion-多壁碳纳米管和胶体金混合均匀；

步骤三、将步骤二制得的混合物涂覆在丝网印刷电极的工作电极的工作区域上，37℃干燥成膜，即得。

4.如权利要求3所述的丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述碳纳米管活化方法为：将5mg多壁碳纳米管溶于15ml活化溶液中，超声30min后，9000rpm离心5min，去除上清后，加入超纯水洗涤，9000rpm离心5min，去除上清，合并残留物，60℃烘箱烘干，加入5ml水，配制成1mg/ml溶液，4℃贮存备用；所述活化溶液为体积比为1∶3的HNO₃和H₂SO₄。

5.如权利要求4所述的丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述Nafion-多壁碳纳米管制备方法为：将1mg所述活化后的多壁碳纳米管溶解于Nafion溶液中，超声分散30分钟后即可，4℃贮存备用；所述Nafion溶液中Nafion质量占溶液总体积的百分比为0.1％。

6.如权利要求5所述的丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述胶体金的制备方法具体为：将100ml的HAuCl₄溶液加热至沸腾，加入1.2ml的柠檬酸三钠溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，制得胶体金溶液；所述柠檬酸三钠溶液中柠檬酸三钠质量占溶液总体积的百分比为1％，所述HAuCl₄溶液中HAuCl₄质量占溶液总体积的百分比为0.01％。

7.如权利要求6所述的丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述壳聚糖与Nafion-多壁碳纳米管和胶体金的混合具体为：将10μl Nafion-多壁碳纳米管溶液和50μl胶体金溶液加入至50μl壳聚糖溶液中，超声混匀；所述壳聚糖溶液中壳聚糖质量占溶液总体积的百分比为2％。

8.一种用如权利要求1所述的丝网印刷电极检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将6μl ZEN-OVA滴加在所述工作电极区域，37℃放置30min；

步骤二，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，滴加8μl BSA溶液，以封闭工作电极，37℃放置30min；所述BSA溶液中BSA质量占溶液总体积的百分比为1％；

步骤三，取0.75g待测样品，加入3ml甲醇溶液，震荡、静置、离心后，使用0.01M PBS稀释5倍，取5μl备用；

步骤四，将抗ZEN单克隆抗体分别与不同浓度的ZEN标准品和待测样品稀释液混合，37℃孵育60min；

步骤五，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，滴加6μl抗ZEN单克隆抗体和ZEN标准品或待测样品稀释液的混合溶液，37℃放置30min；

步骤六，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，滴加6μl HRP标记的羊抗鼠二抗，37℃放置30min；

步骤七，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，将丝网印刷电极放入10ml pH为7.4的0.01M PBS的缓冲液中，测定背景电流，记录为I₀；

步骤八，将丝网印刷电极取出，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，放入10mlpH为7.4的0.01M PBS的缓冲液中，再加入过氧化氢和氢醌，使其浓度分别为2mM和0.1mM，搅拌溶液20min后，停止搅拌，测定电流，记录为I，电流变化值_ΔI＝I-I₀；

步骤九；使用Excel软件，将ZEN标准品不同浓度与相对应的_ΔI绘制标准曲线，将待测样品相对应的_ΔI带入标准曲线中，得到ZEN浓度，并乘以稀释因子，即为待测样品中ZEN含量。