[发明专利]家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.本发明提供了一种家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒包括以冬虫夏草真菌ITS基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的三对引物：内引物FIP/BIP、外引物F3/B3和环引物LB/LP。

2.如权利要求1所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的三对引物为：

FIP：GTCGCAGTGGCATCTCTCAGTC-ATGCCCGCCAGAGTGC

BIP：AGGAGGGTCTGGGGGTCCTC-CAGCAGTTGCCTCGGC

F3：GGTTGAGATGACGCTCGGA

B3：CCCCCTGCGAACACCA

FL：TACTGCGCAGGGGAGC

BL：CCTGCGAACACCACAGC

3.如权利要求1所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒还包括：稀释液、一次性移液管、反应管。

4.如权利要求3所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的反应管含有冷冻干燥物质，冻干物质含有：Bst DNA聚合酶1～10单位/管，1.6～2mmol/L dNTP、20～50mmol/L Tris-HCl、10～20mmol/L KCl、10～50mmol/L MgSO4、0.1～0.5体积％TritonX-100、0.8～2mmol/L甜菜碱、0.2～2mol/L HNB，内引物FIP/BIP 0.6～1.6ummol/L、外引物F3/B30.1～0.4ummol/L、环引物LB/LP 0.2～0.8ummol/L以上物质溶于10～100ul水中，然后冷冻干燥处理。

5.如权利要求3所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将待检测、阴性和阳性样品分别用剪刀剪成尽可能小的薄片2～8片。

(2)分别放入稀释液中，做好标记，盖好管盖，摇晃混匀，静置。

(3)分别用一次性移液管吸取上清滴加到反应管。

(4)用一次性移液管吸头轻轻吹打反应管中的底部蓝色物质，直至完全溶解。

(5)将反应管放入恒温反应环境反应。

(6)观察反应管颜色变化，蓝色为阳性，浅红色为阴性。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的稀释液为水，含量为100-1500微升。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，恒温反应环境的温度为55-70度，反应的时间为20-200分钟。

8.如权利要求1所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的方法包括用剪刀或者刀片剪切冬虫夏草，取2～8片放入含水的稀释液中，用力摇晃，释放基因。

9.如权利要求1所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的试剂盒包含有冬虫夏草作为阳线对照，以证明试剂盒有效。

10.如权利要求1所述的家用冬虫夏草鉴定试剂盒及其使用方法，其特征在于，所述的试剂盒包含有亚香棒虫草、分支虫草、四川虫草、湖北虫草、安徽虫草、古尼虫草、尼泊尔虫草其中的一种或者几种作为阴性对照，以证明试剂盒有效。