[发明专利]UPLC-TQD联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法。 

背景技术

万古霉素是由一种链霉菌产生的、结构复杂的糖肽类抗生素，其分子式为C₆₆H₇₄C_lN₉O₂₄。主要用于葡萄球菌（包括耐青霉素和耐新青霉素株）、难辨梭状芽胞杆菌等所致的系统感染和肠道感染，如心内膜炎、败血症、伪膜性肠炎等。万古霉素可抑制细菌细胞壁的合成，对金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌等作用强，对难辨校状芽孢杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌等作用也良好。与其他抗生素无交叉耐药性，极少耐药菌株。 

妥布霉素是一种氨基糖苷类抗生素，分子式：C₁₈H₃₇N₅O₉。妥布霉素能够联结在30S和50S的联结位置，阻碍70S复合物的形成，使mRNA不能翻译成蛋白质，导致细胞死亡。主要对革兰阴性菌，如绿脓杆菌、大肠杆菌、克雷白杆菌、肠杆菌属、变形杆菌、枸橼酸杆菌有效。临床主要用于敏感细菌引起的严重感染，如革兰阴性菌特别是绿脓杆菌、大肠杆菌及肺炎杆菌等引起的烧伤感染、败血症、呼吸系统感染、泌尿系统感染、胆囊胆道感染及软组织严重感染等。 

万古霉素可能发生以下不良反应，大多由于过量或快速滴注引起，并明显与产品纯度不够有关。 1．过敏反应与“红颈综合征”：本品过敏反应发生率约为5%，主要表现为皮疹、发热、寒战及过敏样反应。静脉滴注过量或速度过快时可能发生“红颈综合征”，表现为红斑，面颈部甚至胸部潮红，药物热，低血压，甚至发生休克样反应。原因可能与组织胺大量释放有关。 2．肾损害：过量用药或肾功能不全时可能发生严重肾损害，表现为血尿、尿量过多或减少，甚至发生尿毒症。 3．耳毒性：耳鸣，听力减退，甚至听力丧失引起不可逆耳聋。耳毒性可在早期产品纯度存在问题时报道较多，现已少见。耳毒性可因合用其它有耳、肾毒性药物而加重。 4．其它不良反应：如静脉炎；肌内注射时局部疼痛，组织坏死；口服给药治疗伪膜性肠炎时可发生食欲减退，恶心呕吐等消化道反应。 

妥布霉素常见的不良反应为眼局部的毒副作用与过敏反应，如眼睑发痒与红肿、结膜红斑，发生率低于3%；局部应用其他氨基糖甙类抗生素也会出现这些不良反应。尚无应用妥布霉素出现其他不良反应的临床报道。但是如果将眼用妥布霉素眼膏与氨基糖甙类抗生素全身联合用药，就应注意监测血清中总的药物浓度。 

创伤性骨髓炎通常由开放性骨折的术后感染，其次为闭合骨折切开复位或其他骨关节术后出现感染所致。因其病情复杂、病程漫长，并发、后遗症多，临床治疗极为棘手，对病人的生活质量产生严重后果。 

目前显微外科皮瓣植入合并抗生素应用是骨髓炎治疗的主要手段，皮瓣植入与常规手术比具有创伤小、愈合快，并发后遗症减少等优点，载药载体一次性给药大大地降低了抗生素用量，在创伤性骨髓炎的治疗中有很好的推广应用价值。 

目前万古霉素含量测定的主要方法有分光光度法，高效液相法，固相萃取高效液相法，高效液相-质谱联用法，超高液相质谱联用技术等。妥布霉素的含量测定方法主要有浊度法，光度法，酸性染料比色法，高效液相蒸发光散射法（HPLC-ELSD），高效液相柱前衍生化法，柱后衍生化高效液相色谱法，离子交换-脉冲积分安倍法，电喷雾离子阱质谱法，高效液相质谱联用法等。 

因此，对联合应用万古霉素及妥布霉素的骨髓炎患者联合应用万古霉素及妥布霉素的病，建立同时测定引流组织液样本中的万古霉素及妥布霉素含量的方法，能够为药物浓度检测提供方法，达到提高药物使用效率，降低毒副反应的目的。同时测定组织引流液中万古霉素和妥布霉素含量的方法未见文献报道及专利公开。 

发明内容

本发明的目的是建立一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法，为临床药物浓度监测提供方案。 

为了实现上述目的，本发明建立了一种应用超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术（UPLC-TQD），同时测定引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，该方法包括以下的步骤： 

1）对照品的配制

精密称取万古霉素、妥布霉素对照品，分别置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的对照品溶液，备用；

2）内标溶液的配制

精密称取阿替洛尔对照品，置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的内标溶液，备用；

3）样品溶液制备