[发明专利]分泌抗番茄黄化曲叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗番茄黄化曲叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

番茄是全球重要的蔬菜作物，它品种多，适应性广，营养丰富，是全世界总产量最高的30 种农作物之一。双生病毒对番茄的危害是番茄生产的重要制约因素之一，尤其是近几十年来双生病毒病在全球范围的扩展蔓延导致其在番茄上的危害日趋严重。在所有侵染番茄的双生病毒中，番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）危害最为严重。TYLCV最早于1964 年在以色列被发现并正式命名，之后的30 年间该病害迅速扩散到中东、地中海沿岸、东南亚地区、美国、日本、澳大利亚、印度、墨西哥等众多国家和地区。20 世纪90 年代中期，随着双生病毒的传毒介体—B 型烟粉虱入侵我国，导致烟粉虱传番茄双生病毒在我国由东向西、由南向北急速蔓延，严重威胁我国产值近千亿元的番茄产业。2005 年秋，TYLCV首次在广西番茄主产区百色市田阳镇大面积爆发， 2006 年在上海、江苏和浙江等地相继被发现，之后迅速扩展至安徽、山东、河南、河北、广东、重庆、云南、福建、辽宁和北京等地。目前全国已有15 个省（自治区、直辖市）发现该病毒的危害现象，已造成严重损失的地区有浙江、江苏、安徽、山东、河南和河北等省。番茄黄化曲叶病由番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）引起，该病毒隶属于双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus），具有典型的双生病毒孪生颗粒形态，病毒粒子的大小约为20×30 nm。其基因组结构组成因不同分离物而分为单组份或双组份。病毒链上的AV1基因编码病毒的外壳蛋白（Coat protein，CP），与病毒粒子的包装、介体传毒、系统侵染及与寄主的互作相关。感染TYLCV的植株发病症状与病毒分离物、寄主的遗传背景、生长阶段以及环境条件有关，症状的表现会有所差异。发病植株的典型症状为顶部叶片变小、皱缩卷曲黄化，节间缩短，植株明显矮化，开花延迟，花朵减少，坐果少而小，成熟期果实不能正常转色，且成熟不均匀。该病在番茄生长各阶段均可发生。若在开花前感病，果实产量和商品价值均大幅度下降，严重时造成的损失可达100 %。番茄黄化曲叶病毒主要通过B 型烟粉虱传播，烟粉虱获毒后可终生传毒，但不经卵传，研究表明嫁接也可导致病毒的传播，但不能经机械摩擦或种子传毒。TYLCV寄主很广，据报道能够侵染包括栽培作物以及杂草在内的12 个科的30 多种植物，一些无症带毒的杂草和野生植物往往成为下茬番茄作物的侵染源，同时传播介体烟粉虱也具有很广的寄主范围。加上各地区气候条件、品种和栽培方式有所不同，单凭一种方法很难达到有效防治效果，因而对TYLCV的防治应采用因地制宜的综合防治措施，为此建立一套灵敏、快速的病毒检测方法对该病毒的监控和防治具有重要的意义。而目前仅用低效率的电镜观察、RT-PCR方法和核酸杂交等方法对小样本进行病毒检测。本发明以原核表达的TYLCV衣壳蛋白（CP）为抗原通过杂交瘤技术制备了1株抗TYLCV的特异性单克隆抗体，以制备的单抗为核心建立了检测TYLCV的高通量的血清学方法，并成功应用于田间TYLCV的检测，从而为我国番茄黄花病毒病早期监测和预警，防控策略提供物质和技术支持。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗番茄黄花曲叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗应用。

分泌抗番茄黄化曲叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏号为CGMCC No.5538，它能分泌抗番茄黄化曲叶病毒的单克隆抗体。

杂交瘤细胞株分泌的抗番茄黄化曲叶病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-6以上，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与番茄黄化曲叶病毒的外壳蛋白亚基有特异性免疫结合反应。

抗番茄黄化曲叶病毒单克隆抗体在该病毒检测上的应用是以单克隆抗体为核心建立的各种免疫学检测方法和免疫学试剂盒。

本发明与现有技术相比具有的有益效果：1）提供的杂交瘤细胞株能分泌抗番茄黄化曲叶病毒的特异性单克隆抗体，以该单抗为核心建立的dot-ELISA、ACP-ELISA、Tissue-ELISA、和TAS-ELISA等免疫学方法及用这些方法建立的试剂盒能高度特异、准确、灵敏的检测番茄黄化曲叶病毒；2）利用本发明所制备的单克隆抗体检测番茄黄化曲叶病毒，不需要昂贵的电子显微镜、PCR仪等设备；3）利用本发明所制备的单克隆抗体，可有效地用于田间作物中番茄黄化曲叶病毒的检测。

附图说明