[发明专利]产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法有效
申请号: | 201210005499.6 | 申请日: | 2012-01-10 |
公开(公告)号: | CN102550416A | 公开(公告)日: | 2012-07-11 |
发明(设计)人: | 涂艺声;丁明华 | 申请(专利权)人: | 江西师范大学 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 330000 *** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 产石杉碱甲 蛇足 叶状 诱导 增殖 培养 方法 | ||
1.一种产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1.1)材料:蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.ex Murray)Trev.,选择健壮无病虫害的庐山野生蛇足石杉植株,取当年抽生约3cm长的新枝;
(1.2)对外植体清洗消毒;
(1.3)外植体接种在叶状体分化启动培养基上培养至切口处出现绿色小凸点,继续在叶状体分化启动培养基上培养10~15天,绿色小凸点发育成可辨的叶状体组织,此时的叶状体组织迅速增殖;叶状体分化启动培养基:1/2(6,7-V)+NAA 0.1~1.0mg/L,蔗糖用量20~30g/L;
(1.4)将诱导增殖的叶状体组织分割成小块,每瓶45ml左右培养基接种1.0g至1.5g,转接到叶状体继代增殖培养基上培养,叶状体继代增殖培养基:6,7-V+NAA0.1~1.5mg/L或IAA0.1~1.0mg/L,蔗糖用量20~30g/L;
(1.5)叶状体分割继代;一小部分叶状体切割作继代小块,接种到继代增殖培养基上继代培养,以后每40~50天转代一次,每代叶状体生物量鲜重比接种量增加8~13倍,建成叶状体无性繁殖系;另一大部分叶状体收获可提取石杉碱甲。
2.根据权利要求1所述的产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法,其特征在于:培养条件如下:
(2.1)培养参数:恒温24±2℃,相对湿度60%~70%,光照强度为1000~1500lx,日照时长11~14h/d;
(2.2)技术参数:外植体污染率低于10%~20%;叶状体诱导率50%~80%;继代周期40~50d,建立蛇足石杉原植物再生叶状体组织的离体无性增殖系;每代叶状体生物量鲜重比接种量增加8~13倍,离体培养的蛇足石杉叶状体能生产积累石杉碱甲。
3.根据权利要求1所述的产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法,其特征在于:对外植体消毒过程中用自来水洗去枝叶上的灰尘后,再用洗衣粉液浸泡6~10min,然后用软毛笔刷洗枝叶,自来水细流水中漂洗干净,滤纸吸干水滴后装入无菌容器;再以质量分数75%的乙醇和质量分数0.1%~0.5%HgCl2加1滴吐温80先后分次消毒。
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