[发明专利]一种疟疾疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种家蚕重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19c，该病毒保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5602。

2.一种权利要求1所述家蚕重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19c的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)由PCR扩增的方法获得杆状病毒囊膜蛋白gp64信号肽基因序列和杆状病毒囊膜蛋白gp64跨膜域基因序列，通过BamH I/EcoR I和XhoI/HindⅢ双酶切插入pFastBacI载体多克隆位点上下游两端构建的表面展示载体pFastBacI-gp64；

(2)由PCR扩增的方法获得恶性疟原虫主要抗原基因MSP1_19c序列，其5’和3’端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点后，连接到步骤(1)所得表面展示载体pFastBacI-gp64，构建成重组转移质粒pFastBacI-gp64-MSP1_19C；

(3)取步骤(2)所得的重组转移质粒pFastBacI-gp64-MSP1_19C转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，在含有卡那霉素、庆大霉素、四环素、X-gal和IPTG的LB培养板上进行蓝白斑筛选，避光培养40~48h后挑取白斑，培养20~24h后用异丙醇抽提重组杆状病毒基因组，并用M13通用引物、MSP1_19c引物做PCR鉴定；

(4)取步骤(3)所鉴定成功的重组病毒基因组通过脂质体介导法转染家蚕BmN细胞，发病后获得一代病毒悬液0℃~4℃保存，提取病毒基因组用M13通用引物、MSP1_19c引物做PCR鉴定，获得所述家蚕重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19c。

3.种权利要求1所述的重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19c表达的抗原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。

4.一种权利要求3所述抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述的重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19C感染家蚕BmN细胞进行病毒扩增；

(2)针刺接种法接入家蚕蛹；

(3)收集表达的权利3所述抗原蛋白。

5.一种权利要求1所述家蚕重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP1_19c在疟疾疫苗制备中的应用。

6. 一种权利要求3所述的蛋白在疟疾疫苗制备中的应用。