[发明专利]石油降解菌固定化方法及其应用

权利要求书

1.一种石油降解菌固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）石油降解菌的驯化、分离及纯化；

（2）石油降解菌在聚乙烯泡沫上的固定化。

2.根据权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，步骤（1）所述石油降解菌的驯化包括以下过程：吸取石油污染的水加入液体富集培养基中，在25-35℃、80-120r/min的条件下于振荡摇床上培养7~10天，待培养液混浊后，吸取相同体积的培养液注入新的液体富集培养基中；重复上述操作至少五次。

3.根据权利要求2所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，所述液体富集培养基包含以下重量分数的组分：0.2-0.3% (NH₄)₂SO₄、0.03-0.05%酵母浸膏、1-2%石油污染物及0.1-0.2%Na₂HPO₄；所述液体富集培养基以石油污染物为唯一碳源，其pH为 6.8-7.2，灭菌使用。

4.根据权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，步骤（1）所述石油降解菌的分离及纯化包括以下过程：取驯化后的液体富集培养基中单菌落稀释分离，涂布在固体营养琼脂培养基中，在30-35℃进行恒温培养30-50小时，得到分离、纯化的石油降解菌株；将纯化菌株接入固体营养琼脂培养基试管斜面，30-35℃恒温培养24-48小时，待菌生长丰满后，放入4℃冰箱保存备用。

5.根据权利要求4所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，所述固体营养琼脂培养基包含以下重量分数的组分：8-10%蛋白胨，2-3%牛肉浸膏，5-6%NaCl，1.7-2%琼脂；所述固体营养琼脂培养基的pH为7.0，灭菌使用。

6.根据权利要求1所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，步骤（2）所述石油降解菌在聚乙烯泡沫上的固定化包括以下过程：将步骤（1）得到的石油降解菌接种于液体营养培养基中，在25-35℃、80-100r/min条件下培养2-3天至培养基中石油降解菌的数量为10⁸个/mL以上时，与灭菌后的聚乙烯醇泡沫充分混匀，继续振荡培养2-3天。

7.根据权利要求6所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，所述液体营养培养基包含以下重量分数的组分：8-10%蛋白胨、2-3%牛肉浸膏及5-6%NaCl，pH为7.0。

8.根据权利要求6所述的石油降解菌固定化方法，其特征在于，所述聚乙烯醇泡沫是体积为1cm³的聚乙烯醇正方体泡沫。

9.权利要求1-8任意一项所述石油降解菌固定化方法在净化被石油污染的水体中的应用。