[发明专利]肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原及其应用

权利要求书

1.肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述。

2.肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原，其特征在于表达该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述。

3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒。

4.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒pGEX-4T-2/EV71-VP1_6-43、pGEX-4T-2/(EV71-VP1_6-43)₂、pGEX-4T-2/(EV71-VP1_6-43)₄和pGEX-4T-2/(EV71-VP1_6-43)₆。

5.表达肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原的工程菌株，其特征在于宿主菌为大肠杆菌，它含有权利要求3或4所述的重组质粒。

6.肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于以SEQ ID NO.2所述的核苷酸为模板，设计上游引物SEQ ID NO.5和下游引物SEQ ID NO.6，然后进行PCR扩增获得目的基因，经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后克隆至表达质粒pGEX-4T-2，构建重组质粒pGEX-4T-2/EV71-VP1_6-43；分别利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切和EcoRⅠ和BglⅡ双酶切重组质粒pGEX-4T-2/EV71-VP1_6-43产生插入片段和载体，经T4 DNA连接酶连接形成含2个抗原编码基因片段的重组质粒pGEX-4T-2/(EV71-VP1_6-43)₂，同法构建含4个和6个抗原编码基因片段的重组质粒；将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE₃)，获得重组工程菌；利用IPTG诱导表达重组蛋白并纯化获得目的蛋白。

7.权利要求1所述肠道病毒71型特异性重组蛋白抗原在制备单克隆抗体、多克隆抗体以及在制备肠道病毒71型特异性抗体检测试剂盒中的应用。